[发明专利]一种生物制品的痕量DNA提取方法

说明书

一种生物制品的痕量DNA提取方法，包括四个步骤，步骤一：蛋白消化；步骤二：DNA结合；步骤三：DNA洗涤；步骤四：DNA洗脱。本发明在常规操作蛋白酶K消化流程后，采用蛋白促溶剂去除样品中蛋白残留，从而进一步减少残留蛋白导致的PCR抑制。采用旋转混匀的方式实现DNA与磁珠结合，这种混匀是360度上下颠倒的旋转混匀，不会有沉淀产生，可以提高磁珠与DNA的结合效率。在常规乙醇洗涤样品后，增加了不含乙醇的洗涤液B的洗涤。洗涤液B可以溶解一些乙醇所不能溶解的PCR抑制成分，从而可以提高DNA的纯度，减少PCR抑制的现象，同时，洗涤液B的残留不会产生PCR抑制的现象，因此洗涤液B清洗后可以立即进入DNA洗脱步骤，无需乙醇干燥的步骤。

技术领域

本发明涉及生物制品DNA提取方法技术领域，特别是一种生物制品的痕量DNA提取方法。

背景技术

目前生物制品(如单抗药物和CAR-T细胞治疗的病毒提取液)的DNA(脱氧核糖核酸)提取主要以高结合力的超顺磁性的磁珠(磁珠是采用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成的超顺磁性氧化硅纳米磁珠)为基础，实现DNA的高速、无害提取与纯化。提取时，磁珠能在离液盐(如胍盐)缓冲液的环境下，通过氧化硅微观界面与DNA分子特异性地识别和高效结合，进而在外加磁场的作用下，磁珠和缓冲液得以分离，吸附有DNA的磁珠再经洗脱得以纯化。现有的DNA的纯化主要分为四个步骤。一：用消化液和蛋白酶K对样品进行裂解消化，将生物制品的DNA释放到消化液中；二：在离液缓冲液(如胍盐)的条件下将游离的DNA吸附到磁珠表面；三：利用洗涤液与乙醇洗去未被吸附的蛋白质、盐分等杂质；第四：采用非离液盐的缓冲液(如水)将被吸附的DNA从磁珠洗脱，进而获得高纯度DNA溶液。

实际情况下，由于各个生物制品的纯化工艺、成分和蛋白浓度不同，提取中，有些成分(比如残留蛋白、化学试剂残留成分、醇类、糖类和残留细胞质等)会被共纯化出来，因此提取DNA溶液往往会出现DNA提取回收率低和PCR抑制的现象。DNA提取回收率低和PCR抑制的结果会导致荧光定量PCR反应(聚合酶链反应)的Ct值(Cycle Threshold,即每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。)滞后或完全无扩增信号，而数据解读的结果是DNA定量减少了或无DNA存在，但是这与实际情况是不符的，这样一来，诸如细胞表达的蛋白药物、蛋白疫苗或细胞治疗的病毒纯化液存在宿主细胞DNA含量超标的情况，而检测结果显示是宿主细胞DNA含量在正常范围内(产品其实是不合格的，检测结果显示是合格的，也就是假阴性)。

发明内容

为了克服现有生物制品DNA提取中，因技术所限存在的如背景所述弊端，本发明提供了能从生物制品中快速、高效提取残留DNA，且提取的DNA能有效去除PCR抑制的成分，确保后续的荧光定量PCR方法对宿主细胞或提取组织细胞残留DNA进行定量准确性的一种生物制品的痕量DNA提取方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：