[发明专利]用于调节花柄脱落的番茄水通道蛋白SlTIP1;1

权利要求书

1.用于调节花柄脱落的番茄水通道蛋白SlTIP1;1，其特征是：所述水通道蛋白SlTIP1;1的氨基酸序列为见SEQ ID NO：1；所述水通道蛋白SlTIP1;1过表达具有加速番茄花柄脱落的作用，所述水通道蛋白SlTIP1;1不表达或不完全表达具有延缓番茄花柄脱落的作用。

2.根据权利要求1所述的用于调节花柄脱落的番茄水通道蛋白SlTIP1;1，其特征是：所述水通道蛋白SlTIP1;1过表达的方法，包括以下步骤：

（1）扩增SlTIP1;1CDS编码序列：所述SlTIP1;1CDS核苷酸序列见SEQ ID NO：2；提取番茄幼苗总RNA，利用高保真酶KOD-plus-Neo从叶片的cDNA模板中扩增SlTIP1;1CDS序列；所述扩增引物核苷酸序列见SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

（2）使用BP clonase克隆全长SlTIP1;1到pENTR/D-TOPO载体，再用LR clonase克隆到二进制载体pB7YWG2；对入门载体pENTRTM DirectionalTOPO®和最终的pB7YWG2.0-YFP进行LR置换反应；将构建的融合表达载体质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，转化的细菌涂布于含有50mg·L^-1Spec和50mg·L^-1Str的筛选平板上；将目的载体转化农杆菌GV1301，农杆菌介导法转入番茄，获得单拷贝插入的纯合过量表达转基因番茄。

3.根据权利要求1所述的用于调节花柄脱落的番茄水通道蛋白SlTIP1;1，其特征是：所述番茄水通道蛋白SlTIP1;1通过敲除技术使其不表达的方法，包括以下步骤：

构建番茄SlTIP1;1敲除载体：SlTIP1;1的原CDS序列（SEQ ID NO：2）结合正向引物CR-SlTIP1;1sgRNA1和反向引物CR-SlTIP1;1sgRNA2；

所述CR-SlTIP1;1sgRNA1的核苷酸序列为SEQ ID NO：6：

所述CR-SlTIP1;1sgRNA2的核苷酸序列为SEQ ID NO：7：

PCR后，通过EcoRV酶切位点（GATATC）插入pCas9/sgRNA载体；通过DNA重组技术构建CRsltip1;1载体；将CRsltip1;1载体导入农杆菌LB4404，对番茄进行转化，获得敲除植株。

4.根据权利要求1所述的用于调节花柄脱落的番茄水通道蛋白SlTIP1;1，其特征是：所述水通道蛋白SlTIP1;1通过脱落相关基因SlERF52调控表达，所述脱落相关基因SlERF52通过与SlTIP1;1启动子结合以调控其调控表达，方法如下：

脱落相关基因SlERF52的核苷酸序列见SEQ ID NO：3：

将SlERF52全长序列连接到pGADT7载体中生成AD-SlERF52；并将SlTIP1;1启动子片段连接到pAbAi载体中，生成诱饵载体；通过酵母转化方法将SlERF52和SlTIP1;1启动子连接；

所述将SlERF52全长序列连接到pGADT7载体中引物见SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9；所述将SlTIP1;1启动子片段连接到pAbAi载体中引物见SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11。