[发明专利]一种快速检测突变型新型冠状病毒的引物组合物及试剂盒在审
申请号: | 202110049558.9 | 申请日: | 2021-01-14 |
公开(公告)号: | CN113046475A | 公开(公告)日: | 2021-06-29 |
发明(设计)人: | 邢志芳;刘瑞来;蒋浩琴;关明;曹国君;许笑;唐雪梅 | 申请(专利权)人: | 复旦大学附属华山医院 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/93 |
代理公司: | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人: | 郎祺 |
地址: | 200040 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 检测 突变型 新型 冠状病毒 引物 组合 试剂盒 | ||
1.一种快速检测突变型新型冠状病毒的引物组合物,其特征在于,包括针对P681H突变位点的引物组合物和/或针对Y144del突变位点的引物组合物;所述针对P681H突变位点的引物组合物包括引物组和PNA探针;所述PNA探针的序列如SEQ ID NO:8所示;
所述引物组包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、LB引物和LF引物,选自包括序列如SEQ ID NO:2~7的组合物、包括序列如SEQ ID NO:10、14~18的组合物中的一组或者两组;或
所述引物组包括F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物和LB引物,包括序列如SEQ ID NO:9~13的引物;
所述针对Y144del突变位点的引物组合物包括序列如SEQ ID NO:20~24的引物和序列如SEQ ID NO:25的PNA探针。
2.根据权利要求1所述的引物组合物,其特征在于,所述针对P681H突变位点的引物组合物包括序列如SEQ ID NO:2~7的引物和序列如SEQ ID NO:8所示的PNA探针。
3.根据权利要求1所述的引物组合物,其特征在于,所述针对P681H突变位点的引物组合物包括序列如SEQ ID NO:9~13的引物和序列如SEQ ID NO:8所示的PNA探针。
4.根据权利要求1所述的引物组合物,其特征在于,所述针对P681H突变位点的引物组合物包括序列如SEQ ID NO:10、14~18的引物和序列如SEQ ID NO:8所示的PNA探针。
5.一种包括如权利要求1-4任一项所述引物组合物的快速检测突变型新型冠状病毒的扩增体系,其特征在于,还包括模板、反应缓冲液、酶溶液、中性红染料和/或荧光染料以及去离子水。
6.根据权利要求5所述的扩增体系,其特征在于,在所述扩增体系中,F3引物和B3引物的终浓度为0.2μmol/L;FIP引物和BIP引物的终浓度为1.6μmol/L;LB引物和LF引物的终浓度为0.8μmol/L;PNA探针的终浓度为0.8μmol/L。
7.根据权利要求6所述的扩增体系,其特征在于,总体积为25μL的扩增体系包括如下组分:2×反应缓冲液12.5μL,F3引物1μL,B3引物1μL,FIP引物1μL,BIP引物1μL,LB引物1μL,LF引物0或者1μL,PNA探针1μL,8U酶溶液1μL,中性红染料1μL,去离子水2.5μL或1.5μL,模板2μL。
8.根据权利要求5所述的扩增体系,其特征在于,所述扩增体系的反应条件为58℃-68℃,30-60min;所用的设备为普通PCR仪或恒温金属浴。
9.一种包括如权利要求1-4任一项所述引物组合物的快速检测突变型新型冠状病毒的试剂盒,其特征在于,还包括反应缓冲液、酶溶液、中性红染料和/或荧光染料以及去离子水。
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