[发明专利]猪PD-L14QN-AF表位多肽及其应用

说明书

本发明涉及一种猪PD‑L14QN‑AF表位多肽，其氨基酸序列为QDAQINECLIAYGGASFPRITLKVN。本发明的多肽PD‑L14QN‑AF具有与PD‑L1蛋白上对应序列高度一致的空间结构，确保改良后多肽PD‑L14QN‑AF具有更有效的受体识别能力。将两个关键亲水氨基酸突变为结构相近的疏水氨基酸，通过增强疏水作用力增加了与PD‑1蛋白的亲和力，从而发挥出更显著的免疫效应。在PBMC细胞增殖实验中，本发明表位多肽PD‑L14QN‑AF细胞增殖百分比为53.5％，能显著减缓PRRSV增殖效率，下调PD‑1的表达，显著上调IFN‑γ及IL‑2基因的表达与分泌。

技术领域

本发明涉及一种猪PD-L14QN-AF表位多肽及其应用，属于动物分子免疫学领域。

背景技术

目前，猪瘟(CSF)、猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)等多种病毒性疾病对我国养猪业造成巨大经济损失。不少学术研究认为猪PD-1/PD-Ls通路活化是CSFV、PCV2或PRRSV感染引起免疫功能损伤或免疫抑制的重要致病机制之一。如淋巴细胞性脉络丛脑炎病毒(LCMV)、人免疫缺陷病病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)等，多种慢性或持续性病毒感染过程中，PD-1过量表达，活化免疫负调节信号通路，造成机体免疫功能损伤或免疫抑制。

在感染HIV-1的病人体内，嗜中性粒细胞高表达PD-L1，与T细胞表达PD-1和CD57成正相关，通过PD-1/PD-L1通路活化，抑制T细胞免疫功能。目前，抗PD-1或PD-Ls的单克隆抗体治疗病毒性疾病已经进入临床研究阶段。PD-1与PD-L1相互识别能产生负免疫调节信号，该信号通路被激活后可引起免疫功能下降，阻断PD-1与PD-L1的结合可以逆转上述免疫抑制机制，可以恢复免疫细胞的功能，有助于提高机体的免疫系统清除病毒的能力，这也为阻断PD-1/PD-L1介导的感染性疾病免疫疗法提供了可靠的理论基础。抗体阻断PD-1/PD-L1通路是目前研究的主要领域，但是抗体药物易引发免疫相关不良反应，且价格昂贵，而小分子多肽类药物能避免抗体药物难以被快速清除的缺点，毒副作用小，是阻断PD-1/PD-L1通路的新策略。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种猪PD-L14QN-AF表位多肽及其应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种猪PD-L14QN-AF表位多肽，其氨基酸序列为：QDAQINECLIAYGGASFPRITLKVN。

所述的猪PD-L14QN-AF表位多肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)筛选多肽PD-L14：多肽PD-L14的序列位于猪PD-L1蛋白的FG loop区域，起始自第106位氨基酸Ala截止到第126位氨基酸Lys，氨基酸序列为：

AQINECLISYGGASYPRITLK；

(2)优化多肽PD-L14：在多肽PD-L14序列的头尾两端各延长2个氨基酸，起始自第104位氨基酸Gln截止到第128位氨基酸Asn，得到多肽PD-L14QN，其氨基酸序列为：

QDAQINECLISYGGASYPRITLKVN；

(3)多肽PD-L14QN的突变：将多肽PD-L14QN的氨基酸序列中第123位氨基酸Tyr突变为Phe，得到多肽PD-L14QN-F，其氨基酸序列为：

QDAQINECLISYGGASFPRITLKVN；

(4)多肽PD-L14QN-F的突变：将多肽PD-L14QN-F的氨基酸序列中第117位氨基酸Ser突变为Ala，得到多肽PD-L14QN-AF，其氨基酸序列为：

QDAQINECLIAYGGASFPRITLKVN。