[发明专利]一种曲伏前列素有关物质的检测方法

说明书

本发明提供了一种曲伏前列素有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱，紫外检测器检测，流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为磷酸水溶液，流动相B为乙腈‑甲醇，梯度洗脱。本发明通过对流动相、洗脱梯度、流速及柱温的优化设计，使曲伏前列素、15‑epi非对映异构体、5,6反式异构体达到基线分离，可有效测定15‑epi非对映异构体、5,6反式异构体及其他有关物质含量，确保曲伏前列素及其制剂的质量可控。另外，此方法中所用流速相对较小且流动相不含缓冲盐，不易堵塞色谱柱，可提高色谱柱使用寿命和仪器耐用性。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其是涉及曲伏前列素有关物质的检测方法。

背景技术

曲伏前列素为异丙基酯前体药物，经眼部给药后被角膜水解酶水解成活性的游离酸，分布于眼组织中，结合后激活位于睫状肌和小梁细胞中的PG-FP受体。这种活化作用可激发细胞内信号传导的级联反应，导致肌醇三磷酸和甘油二酯的生成，并动员细胞内的钙离子，继而增加细胞中基质金属蛋白酶(MMP)前体的释放。MMP可降解葡萄膜巩膜房水流出途径中的细胞外基质，降低流出阻力，促进房水经葡萄膜巩膜通路流出，降低眼压，制剂为曲伏前列素滴眼液。

曲伏前列素有关物质较多，主要包含曲伏前列素相关化合物A、环氧化衍生物、15-epi非对映异构体、5,6-反式异构体和15-酮衍生物。其中，15-epi非对映异构体、5,6反式异构体为曲伏前列素的异构体，三者极性相近，不易分离，这对曲伏前列素的质量控制增加了难题。

曲伏前列素USP42药典收载的有关物质检测方法，存在诸多问题，例如采用美国药典方法，15-epi非对映异构体与曲伏前列素色谱峰间的分离度小于1.5，不同批次色谱柱保留时间有差异；采用缓冲盐流动相及高流速，易损耗色谱柱，降低柱效。

曲伏前列素滴眼液USP42药典收载的有关物质检测方法中，不同杂质采用不同流动相进行检测，至少需要检测两次，方法繁琐。

曲伏前列素滴眼液进口注册标准(JX20170195)收载的有关物质分析方法采用超高效，供试品浓度不宜过大，浓度稍高，出现过载现象，导致主峰与相邻杂质峰之间分离度不符合规定，不能准确有效的控制其质量。

此外，有文献报道曲伏前列素分析方法，但并未表明曲伏前列素相邻杂质的研究情况，且研究体系如波长，流动相与药典体系相差较大。

因此，我们需要建立一种新的分析方法，不仅可以缩短运行时间，提高色谱柱使用寿命；还可以同时分离检测多种有关物质，尤其是15-epi非对映异构体、曲伏前列素、5,6反式异构体三者之间的有效分离，这对曲伏前列素原料及其制剂质量控制有着重要意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种曲伏前列素有关物质的检测方法，以期至少部分地解决上述技术问题中的至少之一。

本发明涉及的有关物质包括曲伏前列素相关化合物A、环氧化衍生物、15-epi非对映异构体、5,6-反式异构体和15-酮衍生物，具体结构式如下：

本发明提供了一种曲伏前列素有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱，紫外检测器检测，流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为磷酸水溶液，流动相B为乙腈-甲醇，梯度洗脱。

所述梯度设置如下：

进一步的，色谱条件包括：采用十八烷基硅烷键合硅胶填充剂的色谱柱，紫外检测器检测，流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为磷酸水溶液，流动相B为乙腈-甲醇，梯度洗脱，所述梯度设置如下：