[发明专利]一种用于检测肺炎支原体的引物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测肺炎支原体的环介导等温扩增引物组，由下述三对引物组成：分别为MP2‑F3和MP2‑B3、MP2‑FIP和MP2‑BIP、MP2‑LF和MP2‑LP；所述MP2‑F3核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述MP2‑B3核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述MP2‑FIP核苷酸序列如SEQID No.3所示，所述MP2‑BIP核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述MP2‑LF核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述MP2‑LP核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。本发明中的引物组可以显著提升检测效率，缩短检测时间至30分钟之内，较之现有环介导等温扩增方法时间60分钟以上缩短一半，可用于肺炎支原体感染的快速检测，为临床早期诊断和治疗提供了有力的帮助，及时隔离感染者、控制感染扩散争取了时间。

技术领域

本发明涉及一种用于检测肺炎支原体的引物组，具体地说是一种检测肺炎支原体的荧光环介导等温扩增引物组及试剂盒。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,简写为MP)是引起肺炎支原体肺炎(MPP)的主要病原体，而肺炎支原体肺炎大概占到了世界范围内所有肺炎的20-30％，并且有逐年上升的趋势。MP也是引起儿童呼吸道感染的主要病原体。MP感染不仅引起上、下呼吸道疾病，还可以影响人体其他系统，引起肝功能损伤、脑损伤、心肌炎、关节炎等肺外并发症，程度有轻有重，甚至会出现威胁生命的严重并发症。

实验室诊断对疑似MP感染患者的诊治至关重要，但是目前在临床上广泛应用的实验室检测方法，都有其不足支持。作为实验室诊断金标准的 MP培养，需要大概2周左右的时间，而且敏感性不够高。传统的血清学诊断需要急性期和恢复期的双份血清进行比较，这明显不符合门诊及时诊断的要求。尤其是儿童，非常不愿意被采集两次血样。如果单独检测IgM, 可以提示现症感染，但儿童IgM检测的灵敏度一直有争议。PCR检测具有高灵敏度高特异性，以及较血清学检测所需时间更短等优点，但却需要昂贵的仪器，不是所有实验室都配置有PCR仪，同时操作步骤复杂，假阳性高等缺点也制约了临床应用。

2000年，Notomi等人研发出特异、高效的环状恒温DNA扩增技术，即LAMP技术。该方法主要是利用4条特异性引物试别靶基因上的6个特定区域和具有链置换活性的DNA聚合酶，在恒温条件进行扩增反应，扩增效率可达108-1010拷贝。由于其具有可匹敌PCR的灵敏性和特异性，无数的研究基于LAMP技术，成功发展出各种病原体检测方法，广泛应用于临床检测。同时在最初的浊度法LAMP的基础上，又衍生出各种新的LAMP 方法，比如实时荧光LAMP等。

LAMP反应实验不包括前期样本准备，反应时间大概需要60分钟左右，与PCR反应相比大概缩短了一半的检测时间。但是，随着将来PCR技术的发展，反应时间也会缩短，届时LAMP的优势就不如现在这么明显。并且由于目前临床检测需求量大，尤其是到了秋冬季肺炎支原体高发季节，检测量会大幅增加，越短的检测时间给患者争取尽早的治疗，尤其是对于儿童患者，尽早的治疗可遏制疾病的发展及对人体带来的损伤。检测时间的缩短可以提高检测效率，因此，提供一种高灵敏度和特异性的检测技术一直是本领域技术人员研究的重点。

发明内容

为了解决上述现有技术中的问题，本发明所要解决的首要技术问题在于提出一种可有效缩短检测时间，且灵敏度和特异性检测肺炎支原体的荧光环介导等温扩增引物组。

本发明所要解决的另一技术问题在于提出一种上述引物组的用途。

本发明所要解决的又一技术问题在于提出一种含有上述引物组的检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：