[发明专利]一种基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白展示质粒、细胞系及应用

说明书

本发明提供了一种基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白展示质粒、细胞系及应用，属于抗体筛选技术领域，所述哺乳动物融合蛋白展示质粒，包括顺次连接有编码信号肽的基因、编码待筛选蛋白的基因和编码间皮素的基因的融合基因和初始质粒。本发明提供的基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白展示细胞系，将所述哺乳动物融合蛋白展示质粒转入哺乳动物抗体展示细胞获得。本发明提供的基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白的展示质粒，利用间皮素融合蛋白即可膜上表达又可分泌表达的特性，实现待筛选蛋白在哺乳动物细胞的展示，能够大大提高待筛选蛋白的筛选效率；待筛选蛋白和间皮素形成的融合蛋白表达效率更高，并且间皮素有直标抗体，能够辅助指示筛选结果。

技术领域

本发明属于抗体筛选技术领域，尤其涉及一种基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白展示质粒、细胞系及应用。

背景技术

单克隆抗体药物具有较高的靶向性，可以直达病变细胞，能够减少正常细胞受损，减少副作用，因此广泛用于临床。新的单克隆抗体药物的研发主要是通过重组抗体的方式在体外进行抗体文库的构建及筛选。在重组抗体的应用中，常见的展示技术包括噬菌体展示技术、核糖体/mRNA展示技术、酵母表面展示技术等，其中大部分的展示技术都是基于原核表达系统，由于原核表达系统中，表达蛋白过程选择的密码子与真核细胞不同，故用原核表达系统筛选获得的抗体可能无法在体内获得高表达，并且原核表达系统糖基化等翻译后修饰过程与人体表达存在区别，不能很好的应用。

采用哺乳动物细胞表面展示技术可以克服不同宿主，尤其是克服噬菌体展示过程中，糖基化等翻译后修饰过程与人体表达的区别。通过哺乳动物细胞尤其是人源细胞直接进行抗体展示不仅可以快速筛选大容量的抗体文库，而且无翻译后修饰的问题，容易快速进入下一步的表达和生产。

然而，现有的哺乳动物展示常用PDGFR等跨膜蛋白的跨膜区域和抗体分子形成融合蛋白的结构。经过流式细胞术筛选表达抗体的细胞时，只能获得跨膜表达抗体分子的候选细胞。为了进一步检测抗体的活力及亲和力，还需要重新进行测序和分子克隆，制备分泌型的抗体。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白的展示质粒、细胞系及应用；所述展示质粒可以在哺乳动物细胞中展示蛋白结构，用于筛选功能性抗体或者具有亲和力的蛋白。间皮素融合表达后的蛋白还可以分泌表达，既可以通过流式细胞术筛选膜上型表达蛋白，又可以通过ELISA等液相检测技术筛选分泌蛋白；本发明提供的展示质粒具有膜上表达和分泌表达双功能，大大加速了蛋白的筛选速度。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了间皮素在哺乳动物融合蛋白展示中的应用，将所述间皮素与待筛选蛋白在哺乳动物细胞中融合表达。

本发明提供了一种用于哺乳动物细胞展示的融合蛋白，包括顺次连接的信号肽、所述的待筛选蛋白和间皮素。

优选的，所述间皮素的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

优选的，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明提供了编码所述融合蛋白的融合基因，包括编码信号肽的基因、编码待筛选蛋白的基因和编码间皮素的基因。

优选的，所述编码信号肽的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述编码间皮素的基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示。

本发明提供了一种基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白展示质粒，包括所述融合基因和初始质粒。

优选的，所述初始质粒为pcDNA-FRT质粒，所述融合基因重组至所述pcDNA-FRT质粒的NheI酶切位点和NotI酶切位点之间。

本发明提供了一种基于间皮素锚定的哺乳动物融合蛋白展示细胞系，将所述哺乳动物融合蛋白展示质粒转入哺乳动物抗体展示细胞获得。