[发明专利]一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 202110062348.3 | 申请日： | 2021-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN112870181A | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | 袁正强;苏奎;袁倩;黎淑怡;候欢;孙健武;黄超鸿 | 申请（专利权）人： | 广东工业大学 |
| 主分类号： | A61K9/72 | 分类号： | A61K9/72;A61K9/12;A61K47/46;A61K38/17;A61K31/519;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广东广信君达律师事务所 44329 | 代理人： | 彭玉婷 |
| 地址： | 510062 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 复合 细胞 外囊泡 吸入 制剂 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种复合载药的细胞外囊泡吸入制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将表达TRAIL的病毒转染产生细胞外囊泡的细胞，得到表达全长TRAIL的细胞；
(2)培养所述步骤(1)得到的表达TRAIL的细胞，收集细胞培养后的上清液，从上清液中分离得到表达TRAIL的细胞外囊泡，用PBS溶液重悬表达TRAIL的细胞外囊泡，得到表达TRAIL的细胞外囊泡重悬液；
(3)将小分子药物加入到所述步骤(2)中得到的表达TRAIL的细胞外囊泡重悬液中，将小分子药物载入表达TRAIL的细胞外囊泡，得到复合载药的细胞外囊泡重悬液；
(4)将所述步骤(3)中得到的复合载药的细胞外囊泡重悬液雾化，得到复合载药的细胞外囊泡吸入制剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中病毒为慢病毒、逆转录病毒、腺病毒中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中产生细胞外囊泡的细胞为脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞，牙髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞、羊膜间充质干细胞、人胚肾细胞293T、巨噬细胞、NK细胞、DC细胞、T细胞、肿瘤相关成纤维细胞中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中分离方式为超速离心；优选地，所述超速离心的离心力为120000g，所述超速离心的温度为4℃，所述超速离心的时间为2h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中载入方法为超声法、膜穿孔法、共孵育法中的至少一种；优选地，所述步骤(3)中载入方法为超声法。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中载入方法包括以下步骤：将小分子药物溶液与表达TRAIL的细胞外囊泡重悬液混匀后，在冰浴中进行超声处理，超声处理后孵育以促进EV膜的自然修复，孵育结束后，通过超速离心得到复合载药的细胞外囊泡，用PBS溶液重悬浮复合载药的细胞外囊泡，得到复合载药的细胞外囊泡重悬液。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中小分子药物为增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性的药物；优选地，所述步骤(3)中小分子药物为化疗药物、免疫治疗药物、天然活性产物分子、多肽和核酸类药物中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中小分子药物为Dinaciclib。
9.一种采用如权利要求1-8任一所述的制备方法制备的复合载药的细胞外囊泡吸入制剂。
10.如权利要求9所述的复合载药的细胞外囊泡吸入制剂在制备治疗肺肿瘤的药物中的用途。
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