[发明专利]连接有dsDNA的磁性微粒的制备方法

说明书

本发明涉及一种连接有dsDNA的磁性微粒的制备方法，该制备方法包括以下步骤：活化羧基磁性微粒的羧基，制备活化后的羧基磁性微粒；在25℃～60℃的条件下，将dsDNA预热处理0.5h～3h，制备预热后的dsDNA；及在25℃～60℃的条件下，将4‑二甲氨基吡啶、活化后的羧基磁性微粒和预热后的dsDNA和混合反应，制备连接有dsDNA的磁性微粒。上述制备方法效率高、成本低且制得的连接有dsDNA的磁性微粒的特异性好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种连接有dsDNA的磁性微粒的制备方法。

背景技术

双链DNA(dsDNA)抗体是一种能够与人DNA结合的自身抗体。90％以上的系统性红斑狼疮(SLE)病人的血清中均存在dsDNA抗体。dsDNA抗体的测定对于SLE的诊断和鉴别诊断、监视治疗和病情跟踪以及判断预后等有重要意义。

dsDNA抗体检测的主要方法有酶联免疫吸附检测、化学发光免疫法、免疫荧光分析法等，其中，化学发光免疫检测由于具有灵敏度高，线性范围广、检测快速简便、结果稳定等优势，发展越来越快。然而，化学发光免疫检测需要连接有dsDNA的磁性微粒。目前连接有dsDNA的磁性微粒主要是利用亲和素标记的磁珠与生物素标记的dsDNA结合而成。其中，生物素标记的dsDNA的制备方法主要是PCR扩增法和光敏生物素标记法。PCR扩增法需要酶、dNTP和生物素标记的dUTP，使得生产成本高，难以工业推广；而光敏生物素标记法中光敏生物素随机插到DNA的碱基上，容易导致DNA和其抗体结合的特异性降低。因此，目前的方法制备连接有dsDNA的磁珠的要么成本较高，要么特异性较差。

发明内容

基于此，有必要提供一种成本较低且特异性好的生物素标记的dsDNA的制备方法。

一种连接有dsDNA的磁性微粒的制备方法，包括以下步骤：

活化羧基磁性微粒的羧基，制备活化后的羧基磁性微粒；

在25℃～60℃的条件下，将含有dsDNA的溶液预热处理0.5h～3h，制备预热后的dsDNA；及

在25℃～60℃的条件下，将4-二甲氨基吡啶、所述活化后的羧基磁性微粒和所述预热后的dsDNA混合反应，制备连接有dsDNA的磁性微粒。

上述连接有dsDNA的磁性微粒的制备方法通过加热将dsDNA的3’末端的羟基更充分暴露，提高dsDNA的反应活性，并添加4-二甲氨基吡啶进行催化，使得dsDNA与羧基磁性微粒的酯化反应快速进行，提高了制备连接有dsDNA的磁性微粒的效率，并且上述制备方法不需要酶，操作简单易行，节约成本。同时，由于未采用随机插入的方式引入光敏标记，且在25℃～60℃的条件下加热dsDNA不会造成dsDNA的结构不可逆的变化，不会影响dsDNA与其抗体结合的特异性。因此，上述制备方法效率高、成本低且制得的连接有dsDNA的磁性微粒特异性好。

在其中一个实施例中，对所述含有dsDNA的溶液进行预热处理的温度为35℃～50℃。

在其中一个实施例中，对所述含有dsDNA的溶液进行加热处理的时间为1h～2h。

在其中一个实施例中，在所述将4-二甲氨基吡啶、所述活化后的羧基磁性微粒和预热后的dsDNA混合反应的步骤中，所述混合反应的温度为35℃～50℃。

在其中一个实施例中，4-二甲氨基吡啶与所述活化后的羧基磁性微粒中羧基的摩尔比为(0.05～0.3)：1。

在其中一个实施例中，在所述将4-二甲氨基吡啶、所述活化后的羧基磁性微粒和所述预热后的dsDNA混合反应的步骤中，所述活化后的羧基磁性微粒与所述预热后的dsDNA的混合液的pH为6～7.5。

在其中一个实施例中，所述羧基磁性微粒为羧基纳米磁珠，所述羧基磁性微粒的粒径为0.5μm～3μm。