[发明专利]一种外周血造血干细胞采集物来源的嵌合抗原受体T细胞的制备及应用

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体T淋巴细胞的制备方法，其包括以下步骤：

1）获得以粒细胞集落刺激因子动员后采集得到的外周血造血干细胞采集物；

2）由所述外周血造血干细胞采集物中分离，并以磁珠阴性筛选方法获得T淋巴细胞；

3）激活T淋巴细胞，并以包含嵌合抗原受体的慢病毒载体感染激活的T淋巴细胞，得到嵌合抗原受体T淋巴细胞。

2.一种T淋巴细胞的分离方法，其包括以下步骤：

1）获得以粒细胞集落刺激因子刺激后采集得到的外周血造血干细胞采集物；

2）由所述外周血造血干细胞采集物中分离，并以磁珠阴性筛选方法获得T淋巴细胞。

3.根据权利要求1所述的制备方法或权利要求2所述的分离方法，其特征在于，所述的外周血造血干细胞采集物为健康受试者接受粒细胞集落刺激因子动员后进行外周血造血干细胞采集获得的外周血造血干细胞采集物。

4.根据权利要求1所述的制备方法或权利要求2所述的分离方法，其特征在于，步骤2）所得的T淋巴细胞中初始细胞、干细胞样记忆T细胞和中央记忆T细胞的数量总和占T淋巴细胞总数量的50%以上，优选为60%以上；

更优选地，中央记忆T细胞数量和占T淋巴细胞总数量的25%以上；

更优选地，初始细胞和干细胞样记忆T细胞数量总和占T淋巴细胞总数量的25%以上。

5.根据权利要求1所述的制备方法或权利要求2所述的分离方法，其特征在于，在步骤2）中，分离获得外周血造血干细胞采集物中单个核细胞后将采用阴性筛选的方法去除其中的单核细胞、红细胞、NK细胞、粒细胞，保留T细胞、前T细胞、干细胞。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤3）中，激活T淋巴细胞的方法为CD3/CD28激活磁珠进行激活。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤3）中，慢病毒载体中包含编码靶向肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的序列；优选地，肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原选自CD123、CD19、CD22、CD30、CD171、GD2、GD3、BCMA、Tn Ag、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、SSEA-4、CD20、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、Folate受体α、ERBB2(Her2/neu)KIT、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、IL-13Ra2、间皮素、IL-l lRa、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、PDGFR-β、E7、MAGE Al、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、LMP2、gplOO、bcr-abl、CS-1、CLL-1、CD33、EGFRvIII、TSHR、CD19、酪氨酸酶、、MUC1、EGFR、NCAM、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF-I受体、CAIX、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、豆荚蛋白、HPV E6、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD 179a、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、前列腺特异性蛋白、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、APRIL、NKG2D和它们的任意组合。