[发明专利]一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种单胺氧化酶酶活力检测试剂盒，所述试剂盒包括提取液、基质缓冲液和显色底物，其特征在于，所述显色底物为4-对二甲氨基苄胺盐酸盐，所述基质缓冲液为PIPES缓冲液。

2.根据权利要求1所述的单胺氧化酶酶活力检测试剂盒，其特征在于，所述提取液包括样本提取液和酶提取液，所述样本提取液和酶提取液均为蔗糖水溶液。

3.根据权利要求2所述的单胺氧化酶酶活力检测试剂盒，其特征在于，所述样本提取液中蔗糖含量为5～20mmol/L，所述酶提取液中蔗糖含量为300～500mmol/L。

4.根据权利要求1所述的单胺氧化酶酶活力检测试剂盒，其特征在于，所述PIPES缓冲液中PIPES含量为30～50mmol/L，且所述PIPES缓冲液的pH为6.1～7.5。

5.根据权利要求1所述的单胺氧化酶酶活力检测试剂盒，其特征在于，所述显色底物溶于PIPES缓冲液中形成显色溶液，所述显色溶液中显色底物的含量为4～10mmol/L。

6.一种权利要求1～5任一权利要求所述检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括步骤如下：

S1、用提取液提取血清、血浆、组织或细胞样品，得待测样本；

S2、将待测样本与基质缓冲液、显色底物混合均匀，用酶标仪于355nm测初始OD值，记为A₁；

S3、在固定温度下孵育时间Tmin，用酶标仪于355nm测此时OD值，记为A₂；

若待测样本来自于血清或血浆样品时，采用式(1)计算：

若待测样本来自于细胞、细菌或组织样品时，采用式(2)计算：

其中，V₁为反应体系的总体积，V₂为待测样本的体积，ε：对二甲氨基苯甲醛的摩尔消光系数，d为光径，C_pr为待测样本的蛋白浓度；式(1)中U的定义为：每升血清或血浆样本每分钟催化显色底物产生1nmol对二甲氨基苯甲醛所需要的酶量为一个活力单位；式(2)中U的定义为：每克蛋白每分钟催化显色底物产生1nmol对二甲氨基苯甲醛所需要的酶量为一个活力单位。

7.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，步骤S3所述孵育温度为32～40℃，所述孵育时间T为10～60min。

8.根据权利要求6所述的使用方法，其特征在于，步骤S1所述待测样本的制备过程具体为：

当样本为动物组织样本时，过程具体为：取0.1-0.5g样本，并按0.1g：0.5-0.9mL的比例加入样本提取液进行匀浆，4℃下800-1000×g离心8-10min，弃沉淀；上清液再于4℃下9000-10000×g离心20-30min，弃上清；再加入0.9-1mL酶提取液，混匀，4℃下15000-18000×g离心35-40min，弃上清；最后加入0.9-1mL基质缓冲液工作液，混匀后即为待测样本；

当样本为细胞样本时，过程具体为：在细胞中加入样本提取液，研磨或超声使细胞破碎细胞，将细胞破碎液于4℃下9000-10000×g离心20-30min，弃上清；再加入0.9-1mL酶提取液，混匀，4℃下15000-18000×g离心35-40min，弃上清；最后加入0.9-1mL基质缓冲液，混匀后即得待测样本。