[发明专利]一种聚合互补抗稻瘟病基因培育广谱、持久抗性水稻育种材料的方法

权利要求书

1.一种聚合互补抗稻瘟病基因培育广谱、持久抗性水稻育种材料的方法，其特征包含以下具体步骤：

（1）选择含广谱、持久抗稻瘟病基因A的育种材料和含广谱、持久抗稻瘟病基因B的育种材料作基因供体亲本，分别与受体亲本杂交，获得F₁，分别以F₁-A和F₁-B表示; 所述的含广谱、持久抗稻瘟病基因B的育种材料与广谱、持久抗稻瘟病基因A的育种材料抗性互补；

（2）种植F₁-A和F₁-B种子，开花期分别与轮回亲本回交，得到回交1代BC₁F₁群体，分别以BC₁F₁-A和BC₁F₁-B表示；

（3）种植BC₁F₁-A和BC₁F₁-B群体，在苗期利用与目的抗性基因A和B紧密连锁的分子标记a和b进行分子检测，选择含有目的抗性基因且主要农艺性状和轮回亲本相似的杂合型单株，在开花期继续与轮回亲本回交，获得BC₂F₁群体，分别以BC₂F₁-A和BC₂F₁-B表示；

（4）重复以上步骤（3），直至回交4代，获得BC₄F₁群体，分别以BC₄F₁-A和BC₄F₁-B表示；

（5）种植各BC₄F₁群体，苗期依然利用上述连锁标记分别对目的抗性基因进行分子检测，在标记基因型纯合单株中，选择主要农艺性状选择与轮回亲本相似的单株自交收种，获得BC₄F₂株系，分别以BC₄F₂-A和BC₄F₂-B表示；

（6）重复以上步骤（5），直至自交3代，获得BC₄F₃株系，分别以BC₄F₃-A和BC₄F₃-B表示。

（7）种植BC₄F₃-A和BC₄F₃-B株系，苗期依然利用上述连锁标记分别对目的抗性基因进行分子检测，选择其中开花期取以基因型纯合和农艺性状似轮回亲本、且含抗稻瘟病基因A的单株YD-A作母本，选择其中基因型纯合和农艺性状似轮回亲本、且含抗稻瘟病基因B的单株YD-B作父本授粉杂交，获得杂交种F₁种子，以F₁-A/B表示；

（8）种植F₁-A/B植株，成熟期混收，获得F₂群体，以F₂-A/B表示；

（9）种植F₂-A/B群体，种植规模扩大到500株以上，苗期利用上述连锁标记分别对群体内单株进行目的抗性基因分子检测，选择双基因纯合、且农艺性状似轮回亲本的单株收种，获得F₃种子，以F₃-A/B表示；

（10）种植F₃-A/B株系，重复步骤（9），获得F₄种子，以F₄-A/B表示；

（11）种植F₄-A/B株系，苗期依然进行抗性基因分子检测；孕穗期，用对抗性基因Pigm致病的强毒力单孢菌株R5-1，对各株系进行穗瘟抗性鉴定；成熟期收获双基因纯合、抗菌株R5-1、且农艺性状似轮回亲本的单株，以F₅-A/B表示；其中，所述的强毒力单孢菌株R5-1在CN108456740A中公开；

（12）对收获的F₅-A/B单株种子分成2份，1份苗期进行室内接种鉴定苗瘟抗性；另1份田间种植成株系，孕穗期通过注射法混合接种鉴定穗瘟抗性，成熟期开展农艺性状评价；选择抗苗瘟、穗瘟，且主要农艺性状似轮回亲本的株系，获得聚合双互补基因的的育种材料YD-A/B；

（13）广谱、持久抗稻瘟病育种材料YD-A/B抗性验证，利用多菌株，对育成的广谱、持久抗稻瘟病育材料YD-A/B进行苗瘟、穗瘟抗性单菌系接种鉴定；同时，进行多地稻瘟病病圃鉴定，综合评价育成材料的综合抗性；

其中，所述的含广谱、持久抗稻瘟病基因A的育种材料为含广谱、持久抗稻瘟病基因Pigm的育种材料为谷梅4号，所述的含广谱、持久抗稻瘟病基因B的育种材料为含广谱、持久抗稻瘟病基因Pi-jx的育种材料秀水134；所述的受体亲本为扬稻6号；

步骤（3）中与目的抗性基因Pigm紧密连锁的分子标记为InDel587，其引物序列如SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示；与目的抗性基因Pi-jx紧密连锁的KASP分子标记为正向引物Pi-jx-F-G序列如SEQ ID NO.3所示， 正向引物Pi-jx-F-C序列如SEQ ID NO.4所示，反向通用引物Pi-jx-R序列如SEQ ID NO.5所示；所述正向引物Pi-jx-F-G的5’端加上羧基荧光素FAM的荧光信号标签；正向引物Pi-jx-F-C的5’端加上5-六氯荧光素氨基磷酸酯HEX的荧光信号标签；

步骤（3）-步骤（6）、步骤（10）-步骤（11）中，皆扩大群体规模50株以上；步骤（9）群体规模500株以上。

2.根据权利要求1所述的一种聚合互补抗稻瘟病基因培育广谱、持久抗性水稻育种材料的方法，其特征在于：步骤（12）和步骤（13）中，通过苗期室内接种、孕穗期注射接种和病圃田间抗性鉴定，综合评价育成的广谱、持久抗稻瘟病育种材料YD6-Pigm/Pi-jx的稻瘟病抗性。