[发明专利]一种农业使用的聚谷氨酸的含量分析方法

说明书

本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种农业使用的聚谷氨酸的含量分析方法。具体为高效液相色谱内标定量分析方法，采用大连依利特Hypersil ODS2 150*4.6mm、理论塔板数5000的色谱柱，柱温40℃，检测波长254nm；以谷氨酸为标样，以甘氨酸为内标物，在254nm下得到理想的色谱峰形，采用异硫氰酸苯酯的乙腈溶液进行衍生，以乙腈和甲酸铵水溶液混合体系为流动相，采用内标方法检测水解后谷氨酸总含量，再减去游离的谷氨酸含量即为样品中聚谷氨酸的含量，该方法专属性强，精密度好，特别适用于农业使用的聚谷氨酸的检测。

技术领域

本发明涉及化学检测分析技术领域，具体涉及一种农业使用的聚谷氨酸的含量分析方法。

背景技术

聚谷氨酸(γ-PGA)，又称纳豆菌胶、多聚谷氨酸，它是一种使用微生物发酵法制得的生物高分子，具有水溶性、可生物降解、不含毒性。其作为保水剂、重金属离子吸附剂、絮凝剂、缓释剂以及药物载体等，在化妆品、环境保护、食品、医药、农业、沙漠治理等产业均有很大的商业价值和社会价值。

聚谷氨酸的研究主要包括对它性质研究、产生菌的改良和基因研究、发酵过程研究和提取提取纯化过程研究以及衍生物的生产和性质的研究。目前针对聚谷氨酸的检测方法，一般采用氨基酸分析仪法和凝胶色谱法和柱前衍生高效液相色谱法，但是前两种仪器价格昂贵、普及应用性较低；现有的柱前衍生高效液相色谱法所用色谱条件测定聚谷氨酸含量的方法精度不高。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种农业使用的聚谷氨酸的含量分析方法，采用高效液相色谱法，所检测聚谷氨酸的含量一般在20-30％，以谷氨酸为标样，甘氨酸为内标物，通过优化色谱条件检测农业使用的聚谷氨酸含量，该方法价格低廉，容易得到高含量的纯品，精密度好。

一种农业使用的聚谷氨酸的含量的分析方法，采用高效液相色谱分析方法，试样(聚谷氨酸)用盐酸在高温下分解，蒸发除去盐酸，以谷氨酸为标准物质，甘氨酸为内标物，在三乙胺的乙腈溶液催化作用下，以异硫氰酸苯酯的乙腈溶液进行衍生，经正己烷萃取、蒸馏水稀释后分别得到标准溶液和试样溶液，乙腈和甲酸铵水为流动相，在235-270nm下得到理想的色谱峰形，通过与标准物质的比对，分别计算被测样品中的谷氨酸的总量和游离谷氨酸含量，总谷氨酸含量减去游离谷氨酸的含量即为样品中聚谷氨酸含量。

一种农业使用的聚谷氨酸的含量分析方法，采用高效液相色谱，具体方法如下：

(1)试样用盐酸溶解后蒸发除去盐酸，以谷氨酸为标准物质，以甘氨酸为内标物，在三乙胺的乙腈溶液催化下，以异硫氰酸苯酯的乙腈溶液进行衍生，然后经正己烷萃取、蒸馏水稀释后分别得到试样及标样；

(2)将高效液相色谱的检测波长设定在235-270nm，待仪器基线稳定后按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，分别对标样和试样的峰面积进行平均，得标样和试样的峰面积平均值；

(3)按照下式对谷氨酸衍生物的质量分数进行计算：

式中：

A_s——标样中，谷氨酸或游离谷氨酸衍生物峰面积的平均值；

A_r——标样中，内标物甘氨酸衍生物峰面积的平均值；

m_r——标样中称取内标物甘氨酸的质量；

m_s——标样中称取谷氨酸的质量；

f——标样中谷氨酸或游离谷氨酸衍生物与甘氨酸衍生物的校正因子；

X_i——试样中谷氨酸的质量分数；

A_i——试样中，谷氨酸或游离谷氨酸衍生物峰面积的平均值；