[发明专利]植物组织基因组DNA提取试剂盒及高通量提取方法

说明书

本发明提供一种植物组织基因组DNA提取试剂盒及高通量提取方法。利用本试剂盒可以快速提取较高质量的玉米基因组DNA，提取的DNA能够满足一般的分子标记检测和测序建库等需求。配合本发明的DNA提取方法，既实现了高质量高通量的DNA提取，又极大地提升了整个DNA提取流程的效率，相比于常规提取方案大大降低了DNA提取成本。DNA提取从裂解、纯化到收集产物的整个过程均可由仪器完成，自动化程度高，提取所用的试剂安全性高，可最大程度避免对人体的伤害。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及植物组织基因组DNA提取试剂盒及高通量提取方法。

背景技术

玉米是世界范围内种植最为广泛和产量最高的作物之一，同时在食品、饲料和工业等各个领域中都有着重要的用途，是最为重要的粮食作物和经济作物之一。随着社会发展的不断进步和各方面的因素，未来我国对玉米的需求和产量相比仍会有着巨大的缺口，但玉米的种植面积在近年来却有着微量减少的趋势。如何利用有限的土地资源来满足日益增长的需求，培育更加优秀的玉米品种是解决这一问题的最有效手段之一，而分子标记技术在培育玉米新品种和品种保护中扮演着越来越重要的角色。

脱氧核糖核酸(英文DeoxyriboNucleic Acid，缩写为DNA)是生物细胞内含有的四种生物大分子之一核酸的一种，携带者一切生物体几乎所有的遗传信息，是生物体生长发育和遗传必不可少的生物大分子。DNA提取也成为生物医药和农林牧渔等领域内所有学科科学研究和检测的基础之一。

DNA提取最常用的方法包括酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备等。随着分子标记技术在培育新品种、转基因检测和基因诊断等领域的快速发展和应用，传统的DNA提取方法已经不能满足当今生物技术的要求。磁珠法核酸提取技术应运而生，是生物科学和纳米材料科学相结合的高新技术产品，是我国核酸提取纯化技术的一次重大突破，它彻底解决了我国核酸提取纯化长期依赖进口的局面。

与传统方法相比，磁珠法提取DNA有着无法比拟的优势，如：①提取方法简单，提取时间短，整个过程主要包括四步；②可以实现自动化和高通量提取，即节约了人力成本，又节约了时间成本；③生物磁珠可与核酸特异性结合，而不与其他杂质如蛋白质、糖等结合，因此可以提取得到高质量高浓度的DNA；④操作安全，不使用传统方法中常见的氯仿和苯等有毒有害试剂，既环保又能降低试剂对实验人员身体的伤害。

目前大部分的DNA提取方法仍然存在取样效率低、提取过程时间长、提取高质量DNA的成本较高效率低等问题。如何充分利用磁珠法的独特优势，实现更快速高通量高质量和更低成本的DNA提取，仍然是本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种高通量高质量和低成本的植物组织基因组DNA提取试剂盒。

本发明的另一目的是提供一种从取样到DNA提取完成更加高通量的植物组织基因组DNA提取方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供植物组织基因组DNA提取试剂盒，所述试剂盒包含组织裂解液、磁珠结合液、洗涤液Ⅰ、洗涤液II、洗涤液III和DNA洗脱液；

其中，所述组织裂解液为：0.1％～2％CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)，0.1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷)pH8.0，0.01mol/L EDTA(乙二胺四乙酸)pH8.0，1mol/L氯化钾，1-3％PVP40；

所述磁珠结合液的制备方法为：将直径为300-600nm的硅羟基磁珠与异丙醇混合，用超纯水定容，即得磁珠结合液；所述磁珠结合液中硅羟基磁珠的终浓度为2-5mg/mL，异丙醇的终浓度为90％；一定范围内磁珠浓度越高结合DNA的能力越强；