[发明专利]一种检测人Card9基因多态性的试剂盒、检测方法及应用

说明书

本发明适用于基因多态性检测试剂盒技术领域，提供了一种检测人Card9基因多态性的试剂盒、检测方法及应用，通过采用TaqMan探针法试剂盒检测胰腺炎患者Card9基因rs10870077、rs4077515、rs10781499、rs141992399、rs139265120位点的多态性。本发明首次阐述了Card9基因rs10870077C﹥G多态性是急性胰腺炎的高风险因素，且从Card9基因多态性角度诠释生长抑素治疗急性胰腺炎不同临床疗效的原因，进而为生长抑素治疗急性胰腺炎个体化给药提供临床参考。本发明提供Card9基因多态性的试剂盒及其检测方法，对胰腺炎患者的诊治具有十分重要的临床应用价值。

技术领域

本发明属于基因多态性检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种检测人Card9基因多态性的试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

急性胰腺炎（AP）是消化系统的常见病、多发病，由多种病因引起的胰酶异常激活，继以胰腺局部炎症反应为主要特征，伴或不伴有其他器官功能改变的疾病。临床中，大多数AP患者的病程呈自限性，但约有20%～30%的患者进展为重症急性胰腺炎，治疗棘手、伴随多器官衰竭、病死率高达10%～20%。

基因多态性可能是AP患者重要的影响因素之一，可以增加急性胰腺炎的发病风险。已知，TRLs（Toll样受体）、TNF-α（肿瘤坏死因子α）、IL-8（白介素8）、IL-1β（白介素1β）、IL-6（白介素6）等炎症因子基因多态性是AP严重程度和炎症进展中一个重要的易感因素。

生长抑素抑制机体胰酶分泌及炎症反应，已广泛应用于治疗急性胰腺炎，但部分患者临床疗效不佳。药物基因组学阐述了药物效应的个体化差异通常由遗传多态性引起。

胱天蛋白酶募集域蛋白9是一种表达于髓系细胞的接头蛋白，通常与Bcl10蛋白相互作用，形成Card9/Bcl10复合体，然后激活NF-κB、MAPK炎症信号通路，释放大量炎症因子。

本发明首次发现Card9 rs10870077 C﹥G是急性胰腺炎的高风险因素，且与生长抑素治疗部分胰腺炎患者临床疗效不佳相关。因此，Card9基因多态性的检测，可辅助医生对胰腺炎的发病风险评估，同时为生长抑素胰腺炎个体化给药提供临床参考。

发明内容

本发明提供一种检测人Card9基因多态性的试剂盒、检测方法及应用，旨在胰腺炎患者的诊治提供临床应用价值。

本发明是这样实现的，一种检测人Card9基因多态性的试剂盒，包括引物组和探针；

所述引物组为针对5个Card9基因多态性位点包括rs10870077、rs4077515、rs10781499、rs141992399、rs139265120的引物；

所述探针为选自以下针对引物相应5个Card9基因多态性位点的突变型探针和野生型探针。

优选的，所述探针的5’端标记有荧光基团FAM，3’端标记有淬灭基团BHQ1。

优选的，所述试剂盒还包括PCR预混液，PCR预混液包括UDG酶、DNA聚合酶、PCR缓冲液、MgCl₂、dNTPs和dUTP。

优选的，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品，所述阳性对照品为5种重组质粒的混合液，所述5种重组质粒为含有rs10870077、rs4077515、rs10781499、rs141992399和rs139265120序列的重组质粒，所述阴性对照品为灭菌超纯水。

本发明还提供一种检测人Card9基因多态性的试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

S1、设计得到引物和探针；

S2、提取待检样本DNA，作为检测模板；

S3、配置检测Card9的PCR反应液；