[发明专利]一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：磁分离试剂、第一试剂和第二试剂；所述磁分离试剂为含包被有降钙素原单克隆抗体的磁微粒试剂；所述第一试剂为含生物素标记的降钙素原单克隆抗体溶液；所述第二试剂为含链霉亲和素标记的碱性磷酸酶溶液。本发明提供的PCT试剂盒具有较低的PCT检测灵敏度及较宽的PCT检测范围。

技术领域

本发明属于体外检测技术领域，涉及一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒。

背景技术

细菌或病毒等经由创面、呼吸道、泌尿道、消化道入侵，在严重创伤，全身抵抗力下降，体内正常菌群失调，细菌移位等时，均可引起机体出现严重的感染症状，是引起临床各种并发症，如脓毒症、败血症休克，多器官功能障碍症(multiple organ dysfunctionsyndrome,MODS)，乃至死亡的主要原因。据美国2001年统计资料显示，该年仅重度脓血症就有75.1万例，平均死亡率高达28.5％，这意味着该年死亡的人数竟然是爱滋病(acquiredimmunodeficiency syndrome,AIDS)的近三倍。对感染性疾病及其并发症能早期诊断和及时治疗，可有效降低死亡率。而目前常规使用的诊断指标(如白细胞分类和计数，C-反应蛋白，血常规检查等)，由于是非特异性的，所以易引起误诊或漏诊。

1990年发现的降钙素原(procalcitonin,PCT)经证实其在血清中浓度的增高与感染的发生有密切关系，能为疾病的诊断、鉴别，治疗方案的选择，预后判断等提供新的实验室标准。在正常及健康的个体中，其血清浓度极低，仅为10-50pg/ml，一般方法检测不到。在全身性细菌、真菌及寄生虫感染，系统炎症反应综合症、败血症、急慢性肺炎、急性胰腺炎、活动性肝炎、创伤等患者的血清PCT水平异常增高，其浓度可达正常水平的几倍甚至上万倍；在病毒感染，自身免疫性疾病，器官移植排除反应等患者的血清浓度不增高或轻微增高。这就决定了PCT的高度特异性，因此可用于此类疾病的鉴别诊断，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值，可广泛用于ICU病房、血液科、外科、内科、器官移植科、治疗实验室等。

降钙素原(PCT)来自定位于第11号染色体上(11p15,4)的单拷贝基因，该基因由280个碱基对组成，含6个外显子和5个内含子。转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网内翻译成降钙素原前体(Preprocalcitonin)，包括N端84个氨基酸、活性降钙素和降钙蛋白三部分。降钙素原前体在内源多肽酶作用下剪掉nPro-CT端单一序列，生成116氨基酸的PCT，分子量约为13kD，PCT和降钙素具有一个相同的32个氨基酸的序列(60～91位)。PCT由神经内分泌细胞(包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞)表达，经酶切分解为(未成熟)降钙素、羧基端肽和氨基端肽。

目前用于检测PCT的方法主要有放射性免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析法(GICA)和化学发光免疫分析法(CLIA)。RIA有很高的检测灵敏度，但由于标记物具有放射性危害，标记物稳定性差，废弃物难以处理等缺点，已逐渐退出临床检验领域；ELISA法采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，缩略词为HRP)或碱性磷酸酶标记抗体，并催化底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但ELISA法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目；GICA具有操作简单，检测速度快等优点，但也存在灵敏度低，试剂不稳定，重复性较差，难以进行定量的缺点。

化学发光免疫分析法是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多优点得到了广泛的应用。磁分离化学发光免疫分析法综合采用了目前国际上的两大主流免疫分析尖端技术—悬浮磁微粒载体技术、化学发光检测技术，使系统能够充分满足临床对检测结果的要求。