[发明专利]斑鳢雄性分子标记引物及其应用

权利要求书

1.一种斑鳢雄性分子标记引物，其特征是：该引物为引物对M12或引物对P2，所述引物对M12为Contig-1上游引物和Contig-1下游引物，所述引物对P2为Contig-2上游引物和Contig-2下游引物，其中Contig-1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig-2上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Contig-2下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一种斑鳢性别鉴定的方法，其特征是包括以下步骤：

（1）准备斑鳢DNA样品；

（2）以步骤（1）中的斑鳢DNA样品为模板，采用权利要求1中的引物对M12进行PCR扩增，扩增反应结束后，进行电泳检测，若电泳结果显示具有一条特异性DNA条带，此时所检测的斑鳢DNA样品为雄性斑鳢；

或采用权利要求1中的引物对P2进行PCR扩增，扩增反应结束后，进行电泳检测，若电泳结果显示具有一条特异性DNA条带和两条非特异性雌雄共有DNA条带，此时所检测的斑鳢DNA样品为雄性斑鳢，若电泳结果显示具有两条非特异性雌雄共有DNA条带，此时所检测的斑鳢DNA样品为雌性斑鳢；

步骤（2）电泳结果显示的是雄性具有特异性条带，采用引物对M12扩增出雄性特异性DNA条带的分子大小是902bp；采用引物对P2扩增出雄性特异性DNA条带的分子大小是1915bp，其余两条非特异性雌雄共有DNA条带分别是679bp和1010bp。

3.根据权利要求2所述斑鳢性别鉴定的方法，其特征是：步骤（1）中采用柱式离心法提取斑鳢DNA样品。

4.根据权利要求2所述斑鳢性别鉴定的方法，其特征是：步骤（2）中采用引物对M12或引物对P2进行PCR扩增时，20μL PCR反应体系中包含DNA50 ng，Contig-1上游引物和Contig-1下游引物各0.8μL 或Contig-2上游引物和Contig-2下游引物各0.8μL ，2×Taq PlusMasterMix II 10μL，其余为ddH₂O。

5.根据权利要求2所述斑鳢性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（2）中采用引物对进行PCR扩增时，PCR反应程序是：首先94℃预变性2min；再94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min，共35个循环；再72℃终延伸5min。

6.根据权利要求2所述斑鳢性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（2）进行电泳检测时，采用质量百分含量为1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段的长度。

7.权利要求1所述斑鳢雄性分子标记引物以及权利要求2中的方法在斑鳢全雄性育种方面的应用。