[发明专利]一种鼋基因组DNA的提取方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种鼋基因组DNA的提取方法及应用。本发明通过收集脐带组织，无损伤提取高质量的基因组DNA，可满足后期的遗传多样性、父权关系确定、亲子鉴定等分子生物学分析，对开展濒危动物的有效保护具有重要意义。同时该发明通过在鼋生长早期就获得样本，能够降低分窝分池养殖的成本。本方法同时适用于其它濒危龟鳖动物基因组DNA的获得。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种鼋基因组DNA的提取方法及应用。

背景技术

鼋(Pelochelys cantorii,1864)属脊索动物门、爬行纲、龟鳖目、鳖科、鼋属。成年个体背甲长达1m，是鳖科类最大个体之一。1989年，鼋被列为中国国家一级水生野生保护动物，与大熊猫、白鳍豚相提并论，被称为“水中大熊猫”。鼋成熟个体体重大，性成熟年龄晚，其栖息地生境的不断恶化及人类的乱捕，致使其分布区逐渐缩小，种群数量逐渐减少，已经极度濒危，在一些区域已经灭绝，目前仅人工条件下保有亲本13只。鼋也于2000年被世界自然保护联盟(IUCN)定为濒危动物，2003年入濒临绝种野生动植物国际贸易公约(CITES)附录Ⅱ名单。国内于2014年鼋人工驯养繁殖成功，目前人工驯养的4只亲鼋(2雌2雄)已成功繁育1～6龄子一代幼鼋个体800多只，但目前这些子代个体的遗传多样性怎样？每窝卵是否存在多父权关系？这些问题的解决对濒危物种人工驯养繁育管理、种群资源保护以及再引入工程具有重要指导意义。

鼋属于软壳龟科动物，身体以皮革覆盖，体表受伤易感染发炎，严重时危及生命。刚孵出时仅有13g左右，没有合适的获得基因组DNA样本的方法。鼋每年产卵4～6窝，每窝平均43枚卵，人工条件下卵的出苗率在70％左右，如果前期不能弄清楚子代的亲权关系，则需要分窝分池养殖，2只雌鼋子代个体需要大量的养殖设施和场地。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种鼋基因组DNA的提取方法及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种鼋基因组DNA的提取方法，包括以下步骤：

用灭菌的剪刀剪下稚鼋肚上的脐带，留下长度不少于0.5cm，置于装有纯酒精的离心管中；将剪过脐带的稚鼋，放到盆中自然收干脐带，盘中为5cm厚的蛭石，蛭石与水的质量比为1：1.2；

若看到稚鼋脐带已自然脱落(人为没剪脐带)，将稚鼋放到盆中自然收干脐带(盘中为5cm厚的蛭石，蛭石与水的质量比为1：1.2)；在孵化介质中找到脱落的脐带，置于装有纯酒精的离心管中；

利用试剂盒提取基因组DNA。

进一步地，剪刀剪取长度为0.5cm(约绿豆大小)的脐带。

进一步地，所述试剂盒为MicroElute Genomic DNA Kit试剂盒。

进一步地，离心管中的纯酒精的量为1mL。

本发明还提供了上述的一种鼋基因组DNA的提取方法在鼋遗传多样性研究、父权关系确定或亲子鉴定中的应用。

本发明还提供了上述的一种鼋基因组DNA的提取方法在濒危龟鳖动物基因组DNA提取中的应用。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：

本发明通过收集脐带组织，无损伤提取高质量的基因组DNA，可满足后期的遗传多样性、父权关系确定、亲子鉴定等分子生物学分析，对开展濒危动物的有效保护具有重要意义。同时该发明通过在鼋生长早期就获得样本，能够降低分窝分池养殖的成本。本方法同时适用于其它濒危龟鳖动物基因组DNA的获得。

附图说明

图1是DNA电泳图。

具体实施方式