[发明专利]可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法

说明书

本发明公开了可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法，包括以下步骤：①在两根碳纤维超微电极上依次修饰Pt颗粒，具体步骤为：使用三电极体系，在氯铂酸钾K₂PtCl₆电解液中通过循环伏安法将铂颗粒还原沉积在碳纤维电极表面；②在修饰铂的一根超微电极CF/Pt上修饰邻苯二胺OPD，具体步骤为：使用三电极体系，在邻苯二胺溶液中，通过循环伏安法将邻苯二胺修饰在其中一根CF/Pt电极上作为一氧化氮工作电极WE_NO，未修饰邻苯二胺的电极作为过氧化氢工作电极本发明通过电化学法修饰铂颗粒和邻苯二胺抗干扰层，制备方法简单、易操作、耗时短，制备出的双微电极具有良好的电子传递能力、极好的生物相容性、高信噪比、高电流密度等电化学特性。

技术领域

本发明涉及电化学分析、电化学传感器技术领域，具体是可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法。

背景技术

过氧化氢(H2O2)作为可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法重要的活性氧物质,在宿主防御和信号传导过程中起着重要作用；一氧化氮(NO)在抑制血小板粘附和激活，抑制肿瘤活性，抑制神经传递活性等生理过程中起到重要作用。两种物质存在紧密的联系，例如：H2O2可以影响血管对NO的舒张；NO与H2O2都是肿瘤细胞内重要的信号分子，高水平NO能提高肿瘤对放射敏感性，而H2O2是肿瘤细胞内重要的信号分子，调控肿瘤细胞生存、增殖和凋亡等生命活动。

因此本发明提出了可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法小尺寸、高灵敏度、高选择性的可在体实时检测的超微电极的制作方法。采用直径仅为几微米的碳纤维作为电极，利用的是其具有良好的电子传递能力、极好的生物相容性、高信噪比、高电流密度等电化学特性；修饰铂颗粒增加了电极的比表面积，增大了电流响应，提高了对检测物的选择性；修饰邻苯二胺增强了电极对H2O2的抗干扰能力；保证两根电极之间的距离大于330μM，尽可能地避免电极在检测时产生串扰；此外，Ag/AgCl参比电极和工作电极集成在一起，进一步减小了电极体积，从而减小电极对组织细胞的损伤，该电极具有锥形针状几何形状，可插入生物组织中，尽可能地减小了对组织产生的创口。

发明内容

本发明的目的在于提供可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

可在体同步检测过氧化氢与一氧化氮的双微电极的制作方法，具体包括以下步骤：

①在两根碳纤维超微电极(CFUMEs)上依次修饰铂(Pt)颗粒，具体步骤为：使用三电极体系，在氯铂酸钾(K₂PtCl₆)电解液中通过循环伏安法将铂颗粒还原沉积在碳纤维电极表面；

②在修饰铂颗粒的一根超微电极(CF/Pt)上修饰邻苯二胺(OPD)，具体步骤为：使用三电极体系，在邻苯二胺溶液中，通过循环伏安法将邻苯二胺修饰在其中一根CF/Pt电极上作为一氧化氮工作电极(WE_NO)，未修饰邻苯二胺的电极作为过氧化氢工作电极

③在θ型毛细玻璃管外涂覆Ag层，并利用电沉积法沉积Ag/AgCl层，作为参比电极，具体步骤为：用去离子水多次冲洗θ型毛细玻璃管外部，晾干后，先在距尖端1cm处用银导电胶将之前准备好的一根铜丝固定在θ型毛细玻璃管外，在向上间隔1cm处以同样的方法把另外一根铜丝固定上。24h后对其依次进行电沉积Ag/AgCl，电解液为1M氯化钾(KCl)溶液，采用计时电位法，进行电化学阳极氧化，设定恒电流为1-2mA，阳极氧化30min-1h，铂电极为对电极，甘汞电极为参比电极。

作为本发明的优选方案：所述碳纤维超微电极包含碳纤维、铜丝和θ型毛细管，碳纤维与铜丝通过银导电胶连接，θ型毛细玻璃管的一端拉制成尖端，用两根粘有碳纤维的铜丝依次从θ型毛细玻璃管平口端穿入，且碳纤维均穿出θ型毛细玻璃管的尖端，调整好电极位置后，先用树脂胶将平口端封住，再用酒精灯外焰将尖端熔固。