[发明专利]一种负载外泌体的PET人工韧带及其制备方法

权利要求书

1.一种负载外泌体的PET人工韧带的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将PET人工韧带置于无水乙醇中浸泡30min以上，然后常温下超声处理5-15min，用去离子水清洗除去乙醇，置于真空干燥箱中至完全干燥；

步骤二，将经步骤一处理后的PET人工韧带置于Tris-HCL溶液中，搅拌使所述Tris-HCL溶液充分浸润所述PET人工韧带，再加入与所述Tris-HCL溶液等体积的多巴胺盐酸盐溶液，反应18-36h后，用去离子水清洗所述PET人工韧带，置于真空干燥箱中至完全干燥，得到聚多巴胺修饰的PET人工韧带；

步骤三，将步骤二所制得的聚多巴胺修饰的PET人工韧带置于外泌体悬液中，4-37℃条件下反应10-20min，反应结束后，即得所述负载外泌体的PET人工韧带。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体为来源于人骨髓间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、人脂肪干细胞、人肌腱干细胞或人外周血干细胞的分泌物，且含有标志蛋白CD63和HSP70。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体悬液的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，当所述人骨髓间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、人脂肪干细胞、人肌腱干细胞或人外周血干细胞的细胞融合度为70％至80％时，用磷酸盐缓冲液冲洗，然后在新鲜的无血清培养基中培养48h-60h，以获得第一上清液；

步骤二，将所述第一上清液离心后，弃沉淀得第二上清液；将所述第二上清液离心后，弃沉淀得第三上清液；将所述第三上清液离心后，弃沉淀得第四上清液；所述第四上清液离心后，弃上清液得第一沉淀物；

步骤三，将所述第一沉淀物用磷酸盐缓冲液重悬后，离心弃上清液得第二沉淀物，重复离心纯化后得纯化外泌体；

步骤四，将所述纯化外泌体悬于磷酸盐缓冲液中配置成所述外泌体悬液。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述外泌体悬液的浓度为20-300μg/ml。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Tris-HCL溶液的pH为8.0-9.0。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多巴胺盐酸盐溶液的浓度为4-6mg/mL。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述真空干燥箱中的温度为37℃。

8.根据权利要求1-7任一项所述制备方法制备的负载外泌体的PET人工韧带。