[发明专利]一种抗糖基转移酶A亚单位的纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗糖基转移酶A亚单位的纳米抗体及其应用，该纳米抗体可变区具有3个互补决定区CDR‑1、CDR‑2、CDR‑3，CDR‑1由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成，CDR‑2由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成，CDR‑3由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成。本发明提供的抗糖基转移酶A亚单位的纳米抗体具有与糖基转移酶A亚单位特异性结合的活性，并中和糖基转移酶A的活性，可以用于检测艰难梭菌，也可用用于制备治疗抗艰难梭菌的药物；该纳米抗体还具有分子量小、亲和力高、结构和性能稳定等特点；能够耐受胃部酸性环境，不易被胃蛋白酶降解等优势。

技术领域

本发明属于抗体技术领域，涉及纳米抗体技术，具体而言，涉及一种抗糖基转移酶A（TcdA）亚单位的纳米抗体及其应用。

背景技术

艰难梭菌(Clostridium difficile，CD)广泛分布于自然环境中，可存活于水，土壤，蔬菜，狗、猫体内及医院环境中，是动物和人肠道中的正常菌群。不规范使用抗生素，使肠道菌群失调，耐药的CD就会大量生长繁殖，导致抗生素相关性腹泻和伪膜性肠炎等疾病，是抗生素相关性腹泻病的主要病原体。CD的芽胞抵抗力强，难消除，可在医院环境长期存在，使CD成为了医院内获得性腹泻的主要病原菌之一。

CD相关疾病的感染与发病主要是产毒型CD在肠道过度增殖并大量释放毒素引起的。正常情况下，肠道中的CD受到双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌等优势菌群的抑制，处于劣势，不致病；当长期大量接受广谱抗菌药物、免疫抑制剂或化疗药物治疗后，肠道微生态平衡被打破，肠道菌群失调，CD过度繁殖并释放毒素，引发艰难梭菌感染(Clostridiμm difficileinfection，CDI)相关疾病。

当CD大量繁殖时，其通过菌体或孢子的表面蛋白破坏结肠正常菌群，然后再定殖，在鞭毛和蛋白酶的协助下，进入黏液层，黏附于肠上皮细胞，释放相关毒素，破坏肠细胞、改变细胞骨架、释放粘液和炎症产物，引起肠道感染性疾病。感染后可能出现高热、血水样便、腹胀、中毒性巨结肠等表现。CD能产生6种毒素，主要致病因子为毒素A、毒素B及二元毒素。而其中的毒素A为肠毒素，可与肠黏膜刷状缘细胞上毒素受体结合，趋化白细胞，激活巨噬细胞、肥大细胞及中性粒细胞，释放强效的炎症递质和细胞因子，从而引起局部黏膜血管的通透性增加，绒毛损害，黏膜出血、坏死；在伪膜性肠炎中，毒素A和B最直接的作用是破坏上皮屏障的紧密联接，促进炎症因子的释放、中性粒细胞的移动和伪膜的形成。由于艰难梭菌毒素A和毒素B的C端都具有一个毒素识别和结合细胞受体的功能区，称为受体结合区（receptor-binding domain，RBD），如果能够研发出针对这一区域的抗体，使RBD被覆盖，就能够直接阻断毒素的结合，使其无法发挥毒素效果，从而达到免疫防御的作用。

由于CD的感染率和感染程度越来越严重，开发新的防治方法就尤为重要了。而鉴于A毒素即糖基转移酶A在CD感染中具有重要的作用，开发能够针对糖基转移酶A的特异性抗体，同样能够在抵抗CDI中发挥主要作用。目前，还没有针对糖基转移酶A RBD的特异性抗体的相关报道。

发明内容

针对目前缺少艰难梭菌有效治疗药物的技术现状，本发明目的旨在提供一种抗糖基转移酶A亚单位（TcdA）的纳米抗体，该纳米抗体具有与糖基转移酶A亚单位的RBD特异性结合的活性，可以用于检测艰难梭菌与抑制艰难梭菌的活性，具有良好的临床应用前景。

本发明提供的抗糖基转移酶A亚单位的纳米抗体，其可变区具有3个互补决定区CDR-1、CDR-2、CDR-3，CDR-1由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成，CDR-2由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成，CDR-3由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成。