[发明专利]一种植物缩合单宁的提取和纯化方法及其应用

说明书

本发明公开了一种植物缩合单宁的提取和纯化方法及其应用，该提取方法采用复合酶提取剂对植物样品进行抽提，该复合酶提取剂中含有漆酶、纤维素酶和果胶酶。本发明首次提出采用酶解法提取缩合单宁，不使用有机溶剂，避免了有机溶剂对环境造成的污染，而且也有效的规避了有机溶剂对植物细胞的破坏，减少因缩合单宁与植物细胞破损流出的蛋白质或微量元素等物质发生络合反应而造成的得率损失。本发明中的提取方法制得的缩合单宁得率、纯度均远超传统方法，具有极高的推广价值。

技术领域

本发明涉及植物天然产物领域，具体涉及一种植物缩合单宁的提取和纯化方法及其应用。

背景技术

单宁是一种复杂多元酚衍生物，是栲胶的主要成分，可使生皮转变为革，所以又叫做植物鞣质。单宁广泛存在于植物的根、茎、叶中，作为一种天然可再生资源，具有品种多、分布广、数量大的优点，是继纤维素、木质素、半纤维素之后在植物中含量较多的一种物质，可与蛋白质、生物碱、多糖等反应。按照单宁的化学结构特征，将其分为水解类单宁和缩合类单宁两大类，缩合类单宁一般为黄烷醇类化合物的衍生物，分子骨架为C₆·C₃·C₆。根据相对分子质量的大小，缩合类单宁又可分为黄烷醇单体和聚合体。习惯上将相对分子质量在500道尔顿(Da)以上的聚合体称为缩合类单宁。

相关技术中，仅公开了对于水解类单宁的提取方法，一般为采用丙酮、乙醚等有机溶剂萃取法，该方法适用于水解类单宁这种低分子量或水溶性好的单宁，对于大分子量的缩合单宁(分子量介于1000-20000Da)的提取效果差，传统的有机溶剂萃取法难以将大分子量的缩合单宁从植物细胞中有效浸提出来。此外，在有机溶剂的作用下，细胞结构容易发生破坏，由于缩合单宁与蛋白质等大分子的络合作用，会导致进一步阻碍提取过程。

因此，亟待开发出一种操作简便、成本低的高效提取植物缩合单宁的提取和纯化方法，以获得优质的植物缩合单宁，以便于缩合单宁的进一步开发和利用。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种缩合单宁的提取方法，能够在不使用有机溶剂的条件下，提取植物中的大分子量的缩合单宁，而且还能有效的保护植物细胞的完整性，减少因缩合单宁与植物细胞破损流出的蛋白质或微量元素等物质发生络合反应而造成的得率损失。

本发明的第一个方面，提供一种缩合单宁的提取方法，包括如下步骤：

(1)取植物样品，加入复合酶提取剂提取，得到粗提物；

(2)取步骤(1)得到的粗提物，加入甲醇溶液溶解，过滤除杂，交联葡聚糖凝胶柱过柱，洗脱得到洗脱液，所述洗脱液即为纯化后的缩合单宁。

根据本发明的一种具体实施方式，至少具有以下有益效果：

1.本发明首次提出采用酶解法制备缩合单宁，并探索得到了最佳的复合酶组合及各组分酶的占比含量，提取率远超传统的有机提取法。

2.本发明中的缩合单宁提取方法，不使用有机溶剂，避免了有机溶剂对环境造成的污染，而且也有效的规避了有机溶剂对植物细胞的破坏，减少因缩合单宁与植物细胞破损流出的蛋白质或微量元素等物质发生络合反应而造成的得率损失。

3.本发明中的缩合单宁提取方法提取得到的缩合单宁得率大于3.0％，纯度大于85.85％。提取得到的缩合单宁聚合度为17～20，缩合单宁中原花青定单宁与原翠雀定单宁的质量比为3.3～4.2，延伸单元表儿茶素含量为62.3％～68.8％，延伸单元表没食子儿茶素含量为23.5％～28.0％，各项数据均优于传统化学有机溶剂提取工艺。

根据本发明的第一个方面，在一些实施方式中，上述步骤(1)中复合酶提取剂中含有漆酶、纤维素酶和果胶酶。

在一些优选实施方式中，上述复合酶提取剂为漆酶、纤维素酶和果胶酶。