[发明专利]一种绵羊细管精液的冷冻保存方法

说明书

本发明涉及一种绵羊细管精液的冷冻保存方法，包括以下步骤：步骤A，将采好的镜检活力在0.7以上的绵羊精液用羊冻精稀释液等温稀释，用细管灌装机灌装后，放入4℃环境中平衡待用；步骤B：将平衡好的绵羊精液细管放入液氮冷冻装置中，所述细管位于液氮面上方、距离液氮面3.5～5cm或8～9cm范围内；步骤C：当绵羊精液细管到达﹣10℃时，盖上液氮冷冻装置的箱盖；步骤D：当绵羊精液细管达﹣100℃后,快速降温至‑140℃，结束冷冻，将细管取出迅速放入液氮中保存。本发明能够获得绵羊精液较高的复苏效果，为小规模绵羊冻精生产提供技术支持，为大规模生产提供依据。

技术领域

本发明涉及绵羊精液冷冻领域，具体涉及一种绵羊细管精液的冷冻保存方法。

背景技术

绵羊的冻精制作和牛的冻精制作工艺类似，要经过采精——稀释液稀释——4℃低温平衡——冷冻这一个过程，而后便可放在液氮环境中储存。稀释液的好坏，在精液稀释、平衡时就可以看出。而冷冻需掌握稀释后精液温度在下降过程中几个危险区域及在精液通过几个危险区域的冷冻速率，冷冻速率与精液所处环境温度有关，温差越大，降温速度越快, 精子冷冻危险温度为4℃～-60℃，有两个节点：一是4℃～-10℃的冷冻速率；二是-10℃～ -60℃冷冻速率。由于生产中要装袋保存，为避免回温应将细管精液冷冻至-120℃分装保存到液氮中。

在以往绵羊精液冷冻过程中，主要参考牛冷冻精液的冷冻过程及降温速率，使用冷冻仪对绵羊精液进行冷冻，但是绵羊精子冷冻效果不稳定，在解冻后镜检活力低，有效精子少，不能进行批量生产。

发明内容

本发明为解决绵羊细管精液冷冻效果不好、解冻后精子活力低的问题，提供一种绵羊细管精液的冷冻保存方法，能够获得绵羊精液较高的复苏效果，为小规模绵羊冻精生产提供技术支持，为大规模生产提供依据。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种绵羊细管精液的冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤A：将采好的镜检活力在0.7以上的绵羊精液用羊冻精稀释液等温稀释，用细管灌装机灌装后，放入4℃环境中平衡待用；

步骤B：将平衡好的绵羊精液细管放入液氮冷冻装置中，所述细管位于液氮面上方、距离液氮面3.5～5cm或8～9cm范围内；

步骤C：当绵羊精液细管到达﹣10℃时，盖上液氮冷冻装置的箱盖；

步骤D：当绵羊精液细管达﹣100℃后，快速降温至-140℃，将细管取出迅速放入液氮中保存。

进一步地，所述步骤A中羊冻精稀释液是将三羟甲基-氨基甲烷、柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖、果糖、EDTA、维生素B、维生素C、氯化钠与双蒸水混合均匀后，使用0.2μm滤膜过滤，各组分的浓度范围为：三羟甲基-氨基甲烷35～38g/L；柠檬酸18～19g/L；柠檬酸钠5～6g/L；葡萄糖35～45g/L；果糖5～8g/L；EDTA 1～2g/L；维生素C 4～6g/L；维生素B 2～5g/L；氯化钠3～4g/L；向过滤后的溶液中加入3000-5000单位青链霉素，配成羊冻精稀释液基础液，取基础液80毫升，加入甘油5毫升、卵黄15毫升，搅拌均匀即为羊冻精稀释液。

进一步地，所述步骤A中平衡时间为4h。

进一步地，所述步骤B中细管位置距离液氮面高度为4cm。

进一步地，在步骤C中，所述绵羊细管精液温度由4℃降温至-10℃所用时间在1.08～ 1.48min范围内；在步骤D中，所述绵羊细管精液温度由-10℃降温至-100℃所用时间在6.36～12.84min范围内。

进一步地，在步骤C中，所述绵羊细管精液温度由4℃降温至-10℃所用时间为1.28min；在步骤D中，所述绵羊细管精液温度由-10℃降温至-100℃所用时间为9.6min。