[发明专利]活菌DNA快速筛选仪、其使用方法和应用

说明书

本发明公开了活菌DNA快速筛选仪、其使用方法和应用，该筛选仪包括PMA顶盖、LED蓝光灯光源和由带有凹槽结构的上箱体和内置有电机的下箱体固定连接为一体的长方体箱式结构，还包括置于上箱体内的数显式计时器、数显式旋转调节器和旋转混匀器，旋转混匀器平行固定于上箱体凹槽内侧且可沿其中轴旋转，其上均匀分布有若干样品放置孔，LED蓝光灯光源为多个且均匀分布于上箱体内，PMA顶盖为不透明材质且橡胶封边的L形平板结构，一边固定于上箱体凹槽开口一侧，一边可沿上箱体凹槽开口另一侧自由开合。本发明将暗处理和光交联合二为一，实现PMA前处理过程的一体化和全自动化，可用于水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的活菌定量检测。

技术领域

本发明涉及微生物分析器材技术领域，具体涉及活菌DNA快速筛选仪、其使用方法和在定量检测水产品中弧菌的应用。

背景技术

弧菌(Vibrio)是水产品中最为常见的致病菌，副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是我国主要水产源致病菌，由该菌引起的食物中毒事件居细菌性食物中毒事件的首位，同时也被视为世界范围内导致腹泻类疾病的最为主要因素之一。霍乱弧菌(Vibrio cholerae)是导致人体产生霍乱疾病的主要源头，流行广泛且属于烈性传染病之一，曾多次引起大面积的疾病，主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，严重的可导致死亡，如何快速、精准和高效地检测水产品中致病弧菌具有重要意义。

传统定量检测食品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的方法通常需要1周时间，基于DNA的qPCR定量技术虽简便快捷，但无法区分样品中死菌和活菌，容易导致假阳性现象。光敏型核酸染料叠氮溴化丙锭(PMA)与qPCR技术相结合，可以选择性地识别水产品中的活菌DNA，可用于进行活菌定量检测。但是，PMA前处理包括暗处理和光交联两个关键步骤，传统的PMA前处理方法通常在一个密闭的环境进行暗处理，手持600W左右的钠钨灯进行光交联(如图1所示)，过程繁琐，全程人工操作费时耗力；基于蓝光LED管的光交联仪器(产自PMA 公司)虽可大大简化PMA前处理过程，但其将暗处理和光交联的两个步骤分开处理，仍需繁琐的人工转移操作。

发明内容

本发明的主要目的是，提供一种活菌DNA快速筛选仪，可将暗处理和光交联两个核心结构合二为一，实现PMA前处理过程一体化和全自动化，可以快速、精准和高效地检测水产品中致病弧菌。

本发明的再一目的是，提供上述活菌DNA快速筛选仪的使用方法。

本发明的再一目的是，提供上述活菌DNA快速筛选仪在定量检测水产品中弧菌的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供的活菌DNA快速筛选仪，包括PMA顶盖、LED蓝光灯光源和由带有凹槽结构的上箱体和内置有电机的下箱体固定连接为一体的长方体箱式结构；

还包括置于所述上箱体内的数显式计时器、数显式旋转调节器和旋转混匀器，所述旋转混匀器平行固定于所述上箱体的凹槽内侧且可沿其中轴旋转，其上均匀分布有若干样品放置孔；

所述LED蓝光灯光源为多个且均匀分布于所述上箱体内；

所述PMA顶盖为不透明材质且橡胶封边的L形平板结构，位于所述旋转混匀器的上方，其一边固定于所述上箱体凹槽开口一侧，另一边可沿所述上箱体凹槽开口另一侧自由开合，当其闭合时与所述上箱体凹槽开口完全密封。

优选地，所述PMA顶盖外侧设有防水绝缘门把手。

优选地，所述LED蓝光灯光源的数量为24个，功率为1-3w，电压参数为3.0-3.7V，电流为350-1000mA，色温波长为410-420nm蓝中偏紫/深蓝光，且与PMA的激发波长一致。

优选地，所述旋转混匀器为304不锈钢材质。

优选地，所述活菌DNA快速筛选仪的尺寸为25cm×20cm×20cm。