[发明专利]人源化胶质瘤PDX小鼠模型及其制备方法和应用有效

专利信息
申请号: 202110082371.9 申请日: 2021-01-21
公开(公告)号: CN112931410B 公开(公告)日: 2022-05-24
发明(设计)人: 刘志雄;罗承科;许胜超;肖志强;陈凌;陈新建 申请(专利权)人: 中南大学湘雅医院
主分类号: A01K67/027 分类号: A01K67/027;A61K49/00
代理公司: 长沙智嵘专利代理事务所(普通合伙) 43211 代理人: 李婷婷
地址: 410008 湖南省*** 国省代码: 湖南;43
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摘要:
搜索关键词: 人源化 胶质 pdx 小鼠 模型 及其 制备 方法 应用
【说明书】:

发明公开了一种人源化胶质瘤PDX小鼠模型,人源化胶质瘤PDX小鼠模型是通过移植人胶质瘤细胞和胶质瘤细胞同源的功能性淋巴细胞获得。本发明的人源化胶质瘤PDX小鼠模型,通过移植人胶质瘤细胞和胶质瘤细胞同源的功能性淋巴细胞获得。在免疫缺陷小鼠体内移植入淋巴细胞,使其具有人的免疫功能,使得小鼠在负荷人胶质瘤的同时表达病人的免疫系统,可模拟人体肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用,在肿瘤免疫治疗药物的研发与临床前评估方面具有重要的应用前景。而且,人源化胶质瘤PDX小鼠模型具有较高的T细胞诱导分化的能力,为胶质瘤的免疫治疗、新药物以及新设备的研发提供了重要的研究工具。

技术领域

本发明涉及肿瘤领域,特别地,涉及一种人源化胶质瘤PDX小鼠模型。此外,本发明还涉及一种包括上述人源化胶质瘤PDX小鼠模型的制备方法和应用。

背景技术

长时期以来,为了研究肿瘤,习惯采用肿瘤细胞株移植到免疫缺陷的小鼠体内,建立肿瘤模型。但是,由于小鼠残存的免疫系统和缺乏人自身的免疫系统,导致实验结果与临床实际出现较大偏差。而且,随着科技的发展,肿瘤免疫治疗是继手术、放疗、化疗与分子靶向治疗后,又一种新的能够改善肿瘤患者生存期的治疗方法。肿瘤免疫治疗的进一步研究需要建立人体肿瘤与人体免疫系统相互作用的动物模型。通常肿瘤模型是利用免疫缺陷动物移植入人体肿瘤细胞或组织,例如:基于临床肿瘤标本建立的人源肿瘤组织来源移植瘤模型(patient-derived xenograft,PDX)较好的保持了原发瘤的特征,但是人源肿瘤细胞系异种移植(cell derived xenograft,CDX)或者PDX模型由于缺乏完整的免疫系统,无法完整的评估抗肿瘤疗效,尤其是免疫治疗的研究,该类动物由于缺乏人体免疫系统,无法针对特定患者的肿瘤细胞或组织开展免疫治疗、靶向治疗研究,免疫治疗如CTLA4、PD-1、PD-L1等,靶向治疗如单克隆抗体。

发明内容

本发明提供了一种人源化胶质瘤PDX小鼠模型,以解决通常肿瘤模型是利用免疫缺陷动物移植入人体肿瘤细胞或组织,由于缺乏完整的免疫系统,无法完整的评估抗肿瘤疗效的技术问题。

本发明采用的技术方案如下:

一种人源化胶质瘤PDX小鼠模型,人源化胶质瘤PDX小鼠模型是通过移植人胶质瘤细胞和胶质瘤细胞同源的功能性淋巴细胞获得。

根据本发明的另一方面,还提供了一种人源化胶质瘤PDX小鼠模型的制备方法,包括以下步骤:

S1、裸鼠胶质瘤模型构建:将病人来源的胶质瘤细胞植入小鼠;

S2、培养:饲养小鼠,待胶质瘤细胞体积增长至62mm3~100mm3

S3、人源化胶质瘤PDX小鼠模型构建:对小鼠以亚致死剂量X射线进行辐照,并移植同源的功能性淋巴细胞,检测小鼠的胶质瘤细胞生长情况和淋巴细胞的增殖分化,获得人源化胶质瘤PDX小鼠模型。

进一步地,步骤S3中淋巴细胞移植方式采用腹腔注射方式。

进一步地,步骤S3中淋巴细胞采用PBMC,PBMC注射量为0.5×106个l~5×106个。

进一步地,步骤S1的裸鼠胶质瘤模型构建具体步骤包括:将病人来源的手术标本肿瘤球培养物离心分离,离心力为200×g,离心时间为5min,将沉淀物采用Accutase细胞消化液消化成单个细胞,采用PBS制备成细胞悬液备用,将细胞悬液缓慢注入小鼠颅内。

进一步地,细胞悬液浓度为5×107/ml,细胞悬液注入量为4μL~5μL。

进一步地,细胞悬液注入速度为1μL/min~5μL/min。

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