[发明专利]一种抗CD105特异性单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种抗CD105特异性单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列是如SEQ ID No：6所示的氨基酸序列，其轻链可变区的氨基酸序列是如SEQ ID No：7所示的氨基酸序列。该抗CD105特异性单克隆抗体，编码所述抗CD105特异性单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No：4所示，编码所述抗CD105特异性单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示。本发明的CD105抗体与人CD105蛋白的结合具有特异性强、检测灵敏度高的特点。本发明抗CD105特异性单克隆抗体适合用于各种恶性肿瘤的诊断检测中，可提高检测的准确度。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是一种抗CD105特异性单克隆抗体及其应用。

背景技术

CD105又名Endoglin，是一种存在于细胞表面的同源二聚体跨膜糖蛋白，能特异性结合转化生长因子β(TGF-β)，TGF-β 是促血管生成作用的多肽细胞因子，可通过调节血管生成、免疫反应和 EMT 促进肿瘤发生。肿瘤新生血管的生成，在肿瘤增殖与转移中具有重要的作用，CD105作为血管内皮细胞增殖的标志之一，可直接参与血管生成，在肿瘤血管生长过程中发挥重要作用。

经研究发现，CD105与肺腺癌、肾细胞癌、结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌等肿瘤组织都具有密切的关系，CD105在不同来源的恶性肿瘤组织及其周围的血管内皮细胞上强表达，且主要表达于未成熟的血管，而在正常组织血管上不表达。因此，可用于各种恶性肿瘤组织中血管生成的研究，也可作为各种恶性肿瘤的生长、转移及预后的检测指标。

基于CD105的检测指标在各种恶性肿瘤、转移及预后等方面的重要应用，所以，获得一株具有高灵敏度、强特异性的抗CD105抗体具有重要意义。

发明内容

（一）要解决的技术问题

鉴于现有技术问题，本发明提供一种抗CD105特异性单克隆抗体，该抗体能广泛应用于各种恶性肿瘤的诊断，且具有极高的特异性和灵敏度。

本发明提供的抗CD105特异性单克隆抗体是由小鼠杂交瘤细胞株产生，经过多种不同肿瘤组织的免疫组织化学检测发现，该抗体可以很好的鉴别恶性肿瘤的发生与转移情况，可用于恶性肿瘤的免疫学诊断。

（二）技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

第一方面，本发明提供一种抗CD105特异性单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列是如SEQ ID No：6所示的氨基酸序列，其轻链可变区的氨基酸序列是如SEQ ID No：7所示的氨基酸序列。

第二方面，本发明提供一种抗CD105特异性单克隆抗体，编码所述抗CD105特异性单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No：4所示，编码所述抗CD105特异性单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示。

其中，用ELISA技术测定该抗CD105特异性单克隆抗体的亚类为小鼠IgG1型单克隆抗体，解离常数为8×10^-7(mol/L)。免疫组织化学实验显示，该抗体能特异识别CD105蛋白，包括但不限于重组CD105抗原蛋白和淋巴造血系统中的CD105分子等。

第三方面，本发明提供一种抗CD105单克隆抗体的制备方法，包括：

S1:免疫：分别用氨基酸序列如SEQ ID No：1-3所示的合成多肽作为免疫原，经由KLH或OVA偶联后，免疫不同的Balb/c小鼠，免疫后取血测定血清抗体效价，选取与各所述合成多肽一一对应的抗体效价最高的小鼠分别进行细胞融合；

S2:细胞融合：骨髓瘤细胞采用鼠来源的sp2/0鼠骨髓瘤样细胞；取小鼠脾淋巴细胞与sp2/0鼠骨髓瘤样细胞进行细胞融合，于HAT培养基中培养，得到杂交瘤细胞；