[发明专利]一种PBMC的CFSE染色方法及其应用

权利要求书

1.一种PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1，冻存PBMC的复苏：将PBMC冻存管放入水浴锅中，摇晃至其完全融化，将融化后的PBMC转移至含有完全培养基的离心管中，进行离心，弃去上清液，加入适量的培养液重悬PBMC并计数；

S2，PBMC的CFSE染色：调整PBMC的细胞浓度，量取一定体积的细胞悬液，加入CFSE染色液，染色5-10min，再加入预冷的染色终止液，离心、弃去上清液、加入适量的完全培养基重悬。

2.根据权利要求1所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

S1，冻存PBMC的复苏：将PBMC冻存管放入水浴锅中，摇晃至其完全融化，将融化后的PBMC转移至含有完全培养基的离心管中，进行离心，弃去上清液，加入适量的培养液重悬PBMC并计数；

S2，PBMC的CFSE染色：加入磷酸缓冲盐溶液调整PBMC的细胞浓度，量取5-10ml的细胞悬液，加入CFSE染色液，室温避光染色5-10min，每隔2-3min颠倒混匀一次，再加入预冷的染色终止液，离心、弃去上清液、加入适量的完全培养基重悬。

3.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，在步骤S1中，所述PBMC冻存管放入水浴锅时，水浴锅的温度为36-38℃。

4.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步骤S1中，所述完全培养基中含有10wt％的胎牛血清。

5.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步骤S1中，所述离心时的离心力为300-500g，离心时间为5-10min。

6.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步骤S2中，加入磷酸缓冲盐溶液调整PBMC的细胞浓度后，所述细胞浓度为2×10⁵/ml～2×10⁶/ml。

7.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步骤S2中，所述CFSE染色液的终浓度为＜2.5μmol/L。

8.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步骤S2中，所述染色终止液的预冷温度为4～8℃。

9.根据权利要求1或2所述的PBMC的CFSE染色方法，其特征在于，步骤S2中，所述染色终止液为胎牛血清、小牛血清、人血清中的一种。

10.一种根据权利要求1-9任一项所述的PBMC的CFSE染色方法的应用，其特征在于，所述染色方法可用于间充质干细胞体外抑制淋巴细胞增殖抑制率的检测方法中。