[发明专利]一种鉴定或辅助鉴定花斑皮蠹的试剂盒及其专用成套引物组

说明书

本发明公开了一种鉴定或辅助鉴定花斑皮蠹的试剂盒及其专用成套引物组。所述成套引物组由引物‑F3、引物‑B3、引物‑FIP和引物‑BIP组成，核苷酸序列依次如序列表中的序列1‑序列4所示。本发明的成套引物组可应用于鉴定待测皮蠹是否为或候选为花斑皮蠹，也可应用于检测待测样本是否含有或候选含有花斑皮蠹，以及区分花斑皮蠹与其它皮蠹。通过实验证明：采用成套引物组鉴定花斑皮蠹，具有高特异性和高灵敏度，可以实现简便、快速、准确检测。本发明具有重大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定或辅助鉴定花斑皮蠹的试剂盒及其专用成套引物组。

背景技术

花斑皮蠹Trogoderma variabile广泛分布于北美洲、欧洲、亚洲和大洋洲，在中美洲和南美洲及非洲也有局部分布,是世界上分布最广泛的仓储害虫之一，也是最常见、最具破坏性的皮蠹害虫之一。我国除西藏、台湾未调查外，全国都有分布。在斑皮蠹属害虫中，花斑皮蠹的危险性仅次于谷斑皮蠹。其主要寄主为多种仓储谷物及其制品、蚕丝、中药材及其他动物型收藏品等160余种被害物。幼虫是为害货物的主要虫态，食性杂，常群集取食、化蛹，并以其蜕皮、虫尸和粪便污染被害物。

近年来花斑皮蠹在世界各口岸的拦截数量稳步增加，其危害日益受到各国的高度关注。由于口岸截获的皮蠹多为形态上极其近似的非成虫虫态，传统形态鉴定难度大、要求高、效率低，其检疫鉴定特别是快速鉴定的需求愈发迫切。

分子鉴定由于不受皮蠹样品个体发育状态和形态特征是否完整的影响，被认为是形态学鉴定的有效补充方法。现有的PCR分子鉴定技术虽然可实现快速、准确的鉴定，但需昂贵的仪器设备，鉴定成本高，不适于在基层部门中推广应用。

环介导恒温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是Notomi博士2000年创立的一种新颖恒温核酸扩增方法，该方法利用特异地识别靶序列上6个区域的4条引物及具有链置换活性的Bst DNA聚合酶，在60-65℃进行核酸的指数级扩增，其扩增效率可达到10⁹-10¹⁰个拷贝数量级，整个反应仅需1h。该方法具有可恒温扩增、检测速度快、灵敏度高、成本低廉和结果可视化的优点。

发明内容

本发明的目的是提供鉴定或辅助鉴定花斑皮蠹的方法及其专用成套引物组。

第一方面，本发明保护用于鉴定或辅助鉴定花斑皮蠹的成套引物组。

本发明保护的用于鉴定或辅助鉴定花斑皮蠹的成套引物组由引物-F3、引物-B3、引物-FIP和引物-BIP组成；

所述引物-F3为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物-B3为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物-FIP为如下a5)或a6)：

a5)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物-BIP为如下a7)或a8)：

a7)序列表中序列4所示的单链DNA分子；