[发明专利]新硫酸软骨素酶及表达硫酸软骨素酶的乳酸乳球菌

权利要求书

1.如(a)或(b)的硫酸软骨素酶突变体，其中：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ IDNO.9任一所示；

(b)氨基酸序列与(a)具有90％以上同源性，并具有第180位甘氨酸、第233位组氨酸和/或第296位精氨酸的硫酸软骨素酶。

2.编码权利要求1所述的硫酸软骨素酶突变体的基因。

3.携带权利要求2所述的基因的表达载体。

4.表达权利要求1所述硫酸软骨素酶突变体或权利要求2所述基因的微生物细胞。

5.根据权利要求4所述的微生物细胞，其特征在于，是乳酸乳球菌细胞。

6.一种重组乳酸乳球菌，其特征在于，以pNZ8148为载体，表达权利要求1所述的硫酸软骨素酶突变体或权利要求2所述的基因。

7.一种提高硫酸软骨素酶酶活的方法，其特征在于，将具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的硫酸软骨素酶做如下至少一种突变：

(1)将第180位由缬氨酸突变成甘氨酸或丙氨酸，

(2)将第233位由丝氨酸突变成组氨酸；

(3)将第296位由脯氨酸突变成精氨酸。

8.一种生产硫酸软骨素酶的方法，其特征在于，将权利要求6所述的重组乳酸乳球菌在培养基中厌氧发酵，生产硫酸软骨素酶。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将重组乳酸乳球菌培养至OD₆₀₀为0.4-0.8，用乳酸菌肽诱导5～20h。

10.权利要求1所述的硫酸软骨素酶突变体在食品、生物医药、化妆品领域制备含低分子量硫酸软骨素的产品中的应用。