[发明专利]用于检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的引物探针、靶标组合、试剂盒和方法

权利要求书

1.用于检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的引物探针组合，其特征在于，含有三对特异性引物和三条特异性探针，其中，所述特异性引物的序列如SEQ ID NO.1-6所示，所述特异性探针的序列如SEQ ID NO.7-9所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述特异性探针分别标记产生不同荧光色的荧光基团，所述荧光基团包括荧光报告基团和荧光猝灭基团；

所述荧光报告基团为选自FAM、HEX、Texas Red、CY5、TET、JOE、CY3、TAMRA、ROX、LCRED640、LC RED705中的任一种；所述荧光猝灭基团为选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl中的任一种。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，序列如SEQ ID NO.7所示的特异性探针的5’端标记FAM荧光报告基团，3’端标记BHQ1荧光淬灭基团；序列如SEQ ID NO.8所示的特异性探针的5’端标记HEX荧光报告基团，3’端标记BHQ1荧光淬灭基团；序列如SEQID NO.9所示的特异性探针的5’端标记Texas Red荧光报告基团，3’端标记BHQ2荧光淬灭基团。

4.用于检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的病毒基因组保守区靶标组合，其特征在于，含有三条靶标，其中，靶标的序列如SEQ ID NO.10-12所示。

5.权利要求1～3任一项所述的引物探针组合或权利要求4所述的病毒基因组保守区靶标组合在制备用于检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的试剂盒中的应用。

6.用于拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒单独或同时检测的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～3任一项所述的引物探针组合，和/或，权利要求4所述的病毒基因组保守区靶标组合。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进行实时荧光定量RT-PCR检测时的反应程序为：50℃逆转录30min；95℃预变性10min，95℃变性15s、60℃退火60s，运行40个循环。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在进行实时荧光定量RT-PCR检测时，每25μL反应体系为：2×缓冲液12.5μL，10μM上游引物0.5μL,10μM下游引物0.5μL，10μM探针0.25μL，酶1μL，模板5μL，用无RNA水解酶的纯净水补足至25μL。

9.一种非疾病诊断目的利用实时荧光定量RT-PCR分别检测拉蒂诺病毒、莫巴拉病毒和莫佩亚病毒的方法，其特征在于，以待测样品的RNA为检测模板，利用如SEQ ID NO.1-6所示的特异性引物和如SEQ ID NO.7-9所示的特异性探针进行实时荧光定量RT-PCR检测，根据扩增曲线判断待测样品中是否含有相应病毒。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量RT-PCR的反应程序为：50℃逆转录30min；95℃预变性10min，95℃变性15s、60℃退火60s，运行40个循环；

所述实时荧光定量RT-PCR的每25μL反应体系为：2×缓冲液12.5μL，10μM上游引物0.5μL,10μM下游引物0.5μL，10μM探针0.25μL，酶1μL，模板5μL，RNase Free Water补足至25μL。