[发明专利]一种重组表达载体、包含其的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含表达对香豆酰辅酶A连接酶的基因和表达芪合成酶的基因，其中，

所述对香豆酰辅酶A连接酶是如下（a）或（b）蛋白质：

（a）具有SEQ NO .1所示的氨基酸序列的蛋白质；

（b）由SEQ NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残疾的取代和/或缺失和/或添加且具有对香豆酰辅酶A活性的由（a）衍生的蛋白质；

所述芪合成酶是如下（c）或（d）的蛋白质：

（c）具有SEQ NO .2所示的氨基酸序列的蛋白质；

（d）由SEQ NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有芪合成酶活性的由（c）衍生的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述表达对香豆酰辅酶A连接酶的基因的核苷酸序列为如下（1）或（2）所述的核苷酸序列：

（1）具有SEQ NO .3所示的核苷酸序列；

（2）编码（a）或（b）所述的蛋白质的核苷酸序列；

所述表达芪合成酶的基因的核苷酸序列为如下（3）或（4）所述的核苷酸序列：

（3）具有SEQ NO .4所示的核苷酸序列；

（4）编码（c）或（d）所述的蛋白质的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述载体为质粒、粘粒、噬菌体或病毒载体中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述载体为pETDuet-1，pCDFDuet-1和pRSFDuet-1或衍生自上述载体的任意一种。

5.包含权利要求1-4任一项所述的重组表达载体的重组表达转化体，通过将上述重组表达载转化至宿主细胞中得到。

6.根据权利要求5所述的重组表达转化体，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌。

7.权利要求6所述的重组表达转化体在赤松素合成上的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，按照1%接种量的重组表达转换体接种到LB培养基中，摇管活化，然后按1%接种量转接至装有LB的锥形瓶中，继续培养，取种子培养液，离心弃上清，将菌泥按初始OD600 0.6~0.8接种至发酵培养基中，并在发酵培养基中加入肉桂酸，同时加入终浓度0.5~1.5 mM IPTG诱导培养。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，在发酵同时添加20-100 μM浅蓝菌素。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，发酵培养基包含M9盐11.3 g/L，酵母提取物5~10 g/L，3-(N-吗啉基)丙磺酸（MOPS）35~45 g/L，甘油3~8% （v/v），大肠杆菌的培养温度为28~45 ºC，转速150~300 rpm，培养时间为8~15 h，发酵时间12~72 h。