[发明专利]无血清干细胞培养基及其应用

说明书

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及无血清干细胞培养基，在基础培养中添加12‑25mg/mL聚乳酸营养微球、1‑10μg/mL谷胱甘肽、1‑4mM L‑谷氨酰胺、浓度40‑60μMβ‑巯基乙醇、0.01‑1mmol/L维A酸和1‑10v/v％非必需氨基酸。本发明还将将上述无血清干细胞培养基用于培养干细胞。本发明提供的无血清干细胞培养基不含动物来源血清，批次间稳定无干扰，有利于产物的分离纯化，缩短适应期，具有更好的细胞增殖速率，使细胞的干性、增殖能力和生理代谢活动能维持更好对抗细胞衰老和凋亡。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及无血清干细胞培养基及其应用。

背景技术

干细胞及其代表的再生医学领域研究近二十年来不断取得重大技术突破，引发了人们对干细胞技术产业化及临床应用的高度重视。截止到2019年，全球已有16款干细胞产品上市，其中间充干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)由于具有多种优点而成为产品最多，发展最为迅猛的干细胞类型。间充质干细胞来源于发育早期的中胚层，是一类非造血干细胞，其广泛存在于骨髓、皮下脂肪、骨外膜、肌肉、滑膜、滑液、肝脏、外周组织、脐带、脐带血及胎盘等组织。干细胞培养使用有血清培养基或无血清培养基。血清培养基大都含有动物血清，血清的成分复杂如最为常见的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)，血清批间差异、成本高等问题，越来越多的科学家通过研究手段确定配细胞生长所需的营养物质成分，并通过试验确定了可以促进细胞生长时这些营养物质在培养基中的最低含量，从而丰富了人们对无血清培养基的认识。无血清培养基一般由基础培养基和替代血清的添加剂两部分组成。基础培养基通常由葡萄糖、氨基酸、无机盐和维生素等按一定比例的组合而成；而添加剂替代了传统培养基中的血清，既能有效避免血清带来的诸多问题，也能满足动物细胞培养的要求。现有技术中的无血清培养基细胞增殖率低，且极易分化或、易引起成体干细胞衰老和凋亡，严重影响了干细胞的数量和质量。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供了无血清干细胞培养基，目的是为了解决现有技术中的无血清培养基细胞增殖率低，且极易分化或、易引起成体干细胞衰老和凋亡，严重影响了干细胞的数量和质量的技术问题。

本发明提供的无血清干细胞培养基，具体技术方案如下：

无血清干细胞培养基，在基础培养中添加12-25mg/mL聚乳酸营养微球、1-10μg/mL谷胱甘肽、1-4mM L-谷氨酰胺、浓度40-60μMβ-巯基乙醇、0.01-1mmol/L维A酸和1-10v/v％非必需氨基酸。

某些实施方式中，所述聚乳酸营养微球的制备方法如下：

将聚乳酸溶于二氯甲烷形成聚乳酸溶液；并将胰岛素、转铁蛋白、BMP-4、FGF-2和细胞生长因子添加进入聚乳酸溶液中形成复合营养液，将所述复合营养液喷雾至60-70℃的水中后进行干燥处理，获得聚乳酸营养微球。

某些实施方式中，胰岛素、转铁蛋白、BMP-4、FGF-2、细胞生长因子和聚乳酸的质量比为0.1-0.5)：(0.01-0.05)：(0.01-0.05)：(0.01-0.05)：(0.3-0.7)：1。

某些实施方式中，所述基础培养基为DEME培养基。

某些实施方式中，所述非必须氨基酸由谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丝氨酸和酪氨酸组成。

无血清干细胞培养基的应用，将上述无血清干细胞培养基用于培养干细胞。

某些实施方式中，所述干细胞的培养的条件为5％CO₂、37℃，密度接种为(0.1-10)×10⁵个/mL。