[发明专利]显齿蛇葡萄叶代用茶的总黄酮检测方法

说明书

本发明是一种显齿蛇葡萄叶代用茶的总黄酮检测方法，该方法包括如下步骤：步骤一、样品前处理；步骤二、标准系列及样品检测；步骤三、测定吸光度，显色反应后测定吸光度值；步骤四、结果计算。本发明以二氢杨梅素计来测定显齿蛇葡萄叶代用茶中总黄酮含量，该方法重现性良好，能够有效地对显齿蛇葡萄叶代用茶中总黄酮进行全面试验和验证，形成完整全面科学的检测方法。

技术领域

本发明涉及检测技术的技术领域，准确的说是一种对显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶、藤茶)进行总黄酮(以二氢杨梅素计)的检测方法。

背景技术

显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶、藤茶)为葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄(拉丁名Ampelopsis grossedentata)，学名为显齿蛇葡萄，常用名有莓茶、藤茶、茅岩莓、神仙草等。显齿蛇葡萄是一种野生藤本植物，其食用部位为叶(嫩叶嫩茎)，野生显齿蛇葡萄广泛分布于我国湖南、湖北、贵州、江西、广西等省份，现市面上销售的显齿蛇葡萄叶代用茶产品主要是用人工种植的显齿蛇葡萄鲜叶为食品原料加工而成的代用茶。2013年12月24日原国家卫生和计划生育委员会，将显齿蛇葡萄叶纳入可用于食品生产加工的新食品原料管理，从此显齿蛇葡萄叶加工制作的代用茶也纳入我国食品生产许可发证范围。2019年国家卫健委将显齿蛇葡萄叶列入最新版食药同源目录。

显齿蛇葡萄叶代用茶含人体必需的17种氨基酸，14种微量元素和含量较高的功能性成份总黄酮≥18％，具有提高人体免疫能力的功能，特别适宜体质虚弱者及免疫力低下者。所以，显齿蛇葡萄叶代用茶作为新品种代用茶己为广大消费者所接受，加之显齿蛇葡萄种植简单、易于管理、投资少收益快、绿色环保可持续、政府政策扶持力度大等原因，近年来显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶、藤茶)产业己成为很多地方的重点发展项目。但是作为质量监控手段，如何监测及控制显齿蛇葡萄叶代用茶的产品质量，特别是总黄酮含量应以什么计，以及用什么方法进行检测，一直以来未有科学的合理的方法。

通常的做法是对食品中总黄酮的进行测定，食品中总黄酮的测定方法主要有直接测定法、薄层色谱法、高效液相色谱法、分光光度计比色法等，高效液相色谱法常用于检测黄酮单体物质如显齿蛇葡萄叶代用茶中二氢杨梅素、杨梅素、杨梅苷等，分光光度计比色法常用于检测总黄酮含量。

但是，由于显齿蛇葡萄叶代用茶是新兴产品，在白秀秀等人《张家界产莓茶中酚性化学成分》一文中研究了张家界产显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶、藤茶)的酚性化学成分，采用柱色谱分离技术以及半制备HPLC法分离化合物，用NMR,HR-MS等波谱学方法鉴定化合物结构，分离得到8个化合物，分别鉴定为:二氢杨梅素(Ⅰ),5,7,3',4',5'-五羟基二氢黄酮(Ⅱ)、没食子酰-β-D-葡萄糖苷(Ⅲ)、没食子酸(Ⅳ)、没食子酸乙酯(Ⅴ)、杨梅苷(Ⅵ)、(2R,3S)-5,7,3',4',5'-五羟基二氢黄酮醇(Ⅶ)、杨梅素(Ⅷ)。但是，在上述的构成成分中，以何种物质为基础进行总黄酮的检测一直以来是大家争论的焦点。因此，显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶、藤茶)中总黄酮没有相应的统一的检测方法，比如总黄酮以什么标准物质计，比如显齿蛇葡萄叶代用茶中总黄酮用什么试剂进行显色反应，又比如检测波长是多少等等，因为没有统一检测方法，故各类检测数据间就没有可比性。

发明内容

鉴于以上现有技术的缺点，本发明的首要目的是提供一种显齿蛇葡萄叶代用茶的总黄酮检测方法，该方法建立一套准确、简便、灵敏、重现性好的检测方法，为显齿蛇葡萄叶代用茶及其总黄酮的开发应用提供检测方法、应用基础和质控标准。

本发明的另一个目的是提供一种显齿蛇葡萄叶代用茶的总黄酮检测方法，该方法以二氢杨梅素计检测显齿蛇葡萄叶代用茶中总黄酮量，用三氯化铝-醋酸钾显色剂，在294nm波长测吸光度值的检测方法，确立显齿蛇葡萄叶代用茶中总黄酮的检测的科学的合理的方法。

基于此，本发明是这样实现的：

一种显齿蛇葡萄叶代用茶的总黄酮检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

步骤一、样品前处理，