[发明专利]一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉及其制备方法

权利要求书

1.一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)纤维蛋白原混悬液制备：于-3～4℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制纤维蛋白原沉淀至粒径0.2～200μm，加入粉碎至粒径5～200μm的药用辅料，混合均匀，得纤维蛋白原混悬液；其中，精制纤维蛋白原沉淀2～5％、药用辅料5～12％、余量为无水乙醇；

精制纤维蛋白原沉淀的制备过程包括如下步骤：

1)冰冻血浆于25～37℃水浴中融解，按终浓度0.2～1.2％的比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，混匀，25±1℃搅拌保温5～7h；血浆降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得一次纤维蛋白原沉淀；

2)于-3～4℃、6～12％乙醇溶液中粉碎步骤1)制得的一次纤维蛋白原沉淀，搅拌10～60min，离心收集沉淀；于复溶液中粉碎沉淀，所述复溶液中含有0.625～1.4％枸橼酸钠、0.425～0.85％氯化钠，pH6.8～7.2；

25～37℃复溶30～90min，得一次复溶液；一次复溶液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得二次纤维蛋白原沉淀；

3)于复溶液中粉碎步骤2)制得的二次纤维蛋白原沉淀，所述复溶液中含有0.625～1.4％枸橼酸钠、0.425～0.85％氯化钠，pH6.8～7.2；

25～37℃复溶30～90min，得二次复溶液；二次复溶液超滤浓缩透析至浓缩液中纤维蛋白原含量为10～25mg/ml；浓缩液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得三次纤维蛋白原沉淀；

4)于-3～4℃无水乙醇中粉碎步骤3)制得的三次纤维蛋白原沉淀，搅拌2～8min，离心收集沉淀，重复2～5次，即得精制纤维蛋白原沉淀；

所述纤维蛋白原悬浮液中含有纤维蛋白原和凝血因子XIII，所述凝血因子XIII在纤维蛋白原中的用量为0.1～0.4IU/mg；

(2)凝血酶混悬液制备：于-3～4℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制凝血酶沉淀至粒径0.2～200μm，加入粉碎至粒径5～200μm的药用辅料，混合均匀，得凝血酶混悬液；其中，精制凝血酶沉淀0.1～0.5％、药用辅料1～8％、余量为无水乙醇；所述凝血酶悬浮液中止血成分为凝血酶和氯化钙，质量比为(0.4～0.8):1；

精制凝血酶沉淀的制备过程包括如下步骤：

1)冰冻血浆于25～37℃水浴中融解，按终浓度0.2～1.2％比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，25±1℃搅拌保温5～7h；或取精制纤维蛋白原沉淀的制备过程中步骤1)的一次纤维蛋白原沉淀上清液；

按照每升血浆或上清液加50～120ml浓度为0.85～1.2mol/L氯化钡溶液，搅拌30～40min，静置20～30min，离心收集沉淀，得凝血酶原钡盐沉淀；

2)取步骤1)制得的凝血酶原钡盐沉淀，加0.25～0.75倍血浆体积的注射用水漂洗，搅拌2～8min，静置5～30min，排上清液，重复2～5次；将漂洗后的沉淀溶解于0.1～0.5倍血浆体积的2.5～5.5％的枸橼酸钠溶液，常温搅拌30～90min，得复溶液；

对复溶液进行超滤浓缩透析，浓缩液体积为0.05～0.2倍血浆体积，加入氯化钙溶液至钙离子终浓度为0.01～0.04mol/L，调节pH至7.0～7.6，于20～30℃激活24～72h；激活结束后，超滤浓缩至浓缩液中凝血酶含量为10～25mg/ml；浓缩液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～19％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得凝血酶沉淀；

3)于-3～4℃无水乙醇中粉碎步骤2)制得的凝血酶沉淀，搅拌2～8min，离心收集沉淀，重复2～5次，即得精制凝血酶沉淀；

(3)将已制备的纤维蛋白原混悬液和凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌，制得纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。

2.根据权利要求1所述的纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的药用辅料为海藻糖、氯化钙、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、蔗糖、右旋糖酐20中的一种或几种。