[发明专利]山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp1801在制备山羊传染性胸膜肺炎疫苗中的应用

说明书

本发明提供了山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp 1801在制备山羊传染性胸膜肺炎疫苗中的应用，涉及生物技术领域。本发明还提供了基于M1801株的疫苗及其制备方法，所述疫苗能提高免疫保护效果，减少免疫副反应，可提供良好免疫保护效果；同时所述M1801株毒力强、免疫原性好、生长性能优良，该菌株制苗可诱导机体产生高水平抗体，抗体产生时间早，滴度高；疫苗安全性高；免疫羊4/5及以上保护，可显著减轻体温升高和咳嗽、打喷嚏、精神沉郁等症状或组织病变。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp 1801在制备山羊传染性胸膜肺炎疫苗中的应用。

背景技术

山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumonia，CCPP)是山羊的一种接触性呼吸道传染病，由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolumsubsp.capripneumoniae，Mccp)引起，临床上以发热、咳嗽、呼吸困难、纤维素性胸膜肺炎及肺脏肝样变为特征，是世界动物卫生组织(OIE) 法定报告的传染病之一。山羊传染性胸膜肺炎主要由接触传播、飞沫传播，新疫区疫病爆发时发病率高达100％，死亡率可高达80％。非洲、中东、亚洲等地区是该病的主要流行地区，近年来，该病感染的宿主范围越来越大，现已成为严重危害世界养羊业和野生反刍动物健康如野山羊、藏羚羊、阿拉伯羚羊等的重要疫病。

山羊传染性胸膜肺炎的防控主要有疫苗和药物等，临床药物使用时效果有限，很难将病原彻底清除。预防免疫是防控山羊传染性胸膜肺炎的重要措施。目前，山羊传染性胸膜肺炎的疫苗主要为灭活疫苗，包括菌体灭活疫苗和组织灭活疫苗。山羊传染性胸膜肺炎组织灭活疫苗存在很大的生物安全风险、制品标准化、病原含量不稳定，容易存在其他病原污染，且工艺复杂，对试验厂房场地要求高，产量有限、副反应较大等问题。菌体灭活疫苗可以克服组织灭活疫苗的部分缺陷，如对疫苗病原含量不稳定，可能其他病原污染等问题，在预防控制山羊传染性胸膜肺炎中发挥重要作用。目前菌体灭活疫苗，制苗菌株为十几年前或更早流行菌株，经甲醛等灭活剂灭活，配以油佐剂等佐剂制成，免疫后部分羊副反应较大，甲醛等灭活剂存在的有效抗原破坏或抗原表位失活的问题，以及对强毒山羊支原体山羊肺炎亚种感染的保护效果有限、成本高等问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp 1801 在制备山羊传染性胸膜肺炎疫苗中的应用，利用Mccp 1801创制的疫苗，可诱导机体产生高水平抗体，抗体产生时间早，滴度高，安全高效。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae)Mccp 1801在制备山羊传染性胸膜肺炎疫苗中的应用。

优选的，所述疫苗的类型包括灭活疫苗。

本发明还提供了一种山羊传染性胸膜肺炎疫苗，所述疫苗中包括山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp 1801的灭活抗原。

优选的，所述疫苗中还包含皂苷和ISA 201 VG双佐剂；

优选的，所述灭活抗原的制备方法，包括：(1)将复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp 1801的菌株接种于改良MTB培养基，经活化培养和扩大培养后，得支原体菌液；所述改良MTB培养基中包括以下浓度的组分：葡萄糖2g/L、丙酮酸钠2g/L、PPLO肉汤21g/L，质量百分含量为25％的酵母浸出液100ml/L，质量百分含量为1％的酚红2.5ml/L、马血清200ml/L、10万IU青霉素，pH值为7.4～7.6；

(2)将所述支原体菌液离心，收集菌体沉淀，重悬后得浓度为100～400 μg/ml的支原体抗原溶液；

(3)将所述支原体抗原溶液与皂苷混合，在4℃条件下灭活24～48h，得灭活抗原。