[发明专利]一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法

权利要求书

1.一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于：将桑叶提取物作为蛹虫草液态发酵培养基成分，在含四价无机硒盐的环境中进行发酵，生产富含桑叶活性成分和纳米硒的蛹虫草菌体。

2.根据权利要求1所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于，所用桑叶为干桑叶，粉碎后热水浸提，并通过D72树脂后获得不同的桑叶提取物。

3.根据权利要求1所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于，所用的四价无机硒盐为亚硒酸钠，在接种后2～4d分别加入到发酵液中，使硒的最终浓度为0.05～18mM，继续发酵至总时间5～9d。

4.根据权利要求1～3任一项所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)称取50g干桑叶，粉碎，过50目筛，将桑叶粉与热水以料水比1:10～1:30，沸水浴提取30～90min，重复三次，合并提取液，获得桑叶粗提物。

(2)将步骤(1)中得到的粗提物通过D72树脂，得到树脂通过液，对其进行沉淀得到桑叶提取物S1；

(3)对步骤(2)中的D72树脂进行二次洗脱，并对洗脱液浓缩，得到桑叶提取物S2和桑叶提取物S3；

(4)配制蛹虫草液态发酵培养基，加入获得的桑叶提取物，灭菌；

(5)将蛹虫草菌种由平板转接至种子培养液，发酵48h，离心得到蛹虫草菌丝种子；

(6)步骤(5)中所得蛹虫草菌丝种子按1：50～1：100g/mL的质量(湿重)体积比与发酵液进行混合，18～25℃，100～180r/min发酵3～6d；

(7)向步骤(6)的发酵液中加入亚硒酸钠溶液，继续发酵，使总发酵时间达7～9d，发酵结束后收集发酵产物。

5.根据权利要求4所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于：所述步骤(2)的树脂通过液浓缩后用4倍体积乙醇沉淀，所得桑叶提取物S1主要成分为多糖、蛋白等大分子成分。

6.根据权利要求4所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于：所述步骤(3)中的二次洗脱为用水对步骤(2)中的D72树脂进行水洗后用乙醇进行洗脱，得乙醇洗脱液，该乙醇洗脱液浓缩浸膏得到桑叶提取物S2，主要为黄酮类成分；再用含有1％氨的乙醇水溶液对D72树脂进行洗脱，其中乙醇水溶液中乙醇的体积含量为70％，得氨水-乙醇洗脱液，该氨水-乙醇洗脱液浓缩浸膏得到桑叶提取物S3，主要为桑叶生物碱类成分。

7.根据权利要求4所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于：所述步骤(4)在发酵培养基中添加的桑叶提取物为S1和/或S2和/或S3。

8.根据权利要求1～4所述的一种桑叶蛹虫草纳米硒菌体发酵方法，其特征在于：发酵后采用3000～5000r/min离心，和/或以抽滤方法，获得富含桑叶提取物和纳米硒的蛹虫草菌体，并采用烘干或冷冻干燥的方式进行干燥。

9.应用权利要求1～8任一项所述方法制备的产品。