[发明专利]一种杨树愈伤组织出芽再生体系的优化方法

说明书

本发明公开了一种杨树愈伤组织出芽再生体系的优化方法，包括以下步骤：步骤一，设计；步骤二，制备；步骤三，优化；其中在上述步骤一中，设计不同浓度植物激素，优化愈伤组织分化培养基，暗培养后为获得高效诱导愈伤组织，通过调整不同TDZ激素的浓度，选出出芽率最高的最适WPM愈伤组织诱导培养基；光培养，约15d继代一次，最后观察生长状况并统计出芽率；该发明，在传统杨树再生体系的基础上，筛选了相应激素浓度，优化了其再生体系，并根据生长情况，增添了把成熟的鱼雷胚状体专门挑出培养这一操作手法，实现了对杨树高效的不定芽培育；同时设计不同浓度梯度的TDZ进行测试，得出浓度为0.02mg/L的TDZ为最适工作浓度，更具有高效性和实用性。

技术领域

本发明涉及植物种植技术领域，具体为一种杨树愈伤组织出芽再生体系的优化方法。

背景技术

植物组织培养是运用细胞再生原理，对植物细胞、组织等进行离体培养的技术。组织培养是快速扩繁的基本手段之一，也是基因功能研究和转基因的重要基础。Parson等在1986年首次证实杨树可以进行遗传转化和表达外源基因，随后杨树组织培养基技术日趋成熟，其基因工程进展也成为研究热点。

杨树是我国重要的造林树种，由于它适应性强、速生、材质好而成为我国最为主要的短周期速生丰产工业用材林树种，在生态环境治理和解决木材短缺等方面占有重要位置。杨树具有基因组构成精简、核基因组相对较小、生长周期短、易于无性繁殖、遗传转化容易等优点，又是根癌农杆菌的天然宿主，因此成为公认的木本植物生物学基础研究的模式树种。无性系84K(Populus alba×Populus glandulosa)杨树为最新一代白杨派杨树新品种。生根容易、苗期与幼树生长快、材质好、抗风能力及抗性强、适应性广。在改善生态和城市绿化上，发挥着重要的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种杨树愈伤组织出芽再生体系的优化方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种杨树愈伤组织出芽再生体系的优化方法，包括以下步骤：步骤一，设计；步骤二，制备；步骤三，优化；

其中在上述步骤一中，设计不同浓度植物激素，优化愈伤组织分化培养基，暗培养后为获得高效诱导愈伤组织，通过调整不同TDZ激素的浓度，选出出芽率最高的最适WPM愈伤组织诱导培养基；光培养，约15d继代一次，最后观察生长状况并统计出芽率；

其中在上述步骤二中，选取一定量的WPM粉、肌醇、蔗糖、MES、葡萄糖酸钙、琼脂和水备用，然后将选取的WPM粉、肌醇、蔗糖、MES、葡萄糖酸钙、琼脂和水混合制备得到WPM；

其中在上述步骤三中，出芽后对其进行操作手法的优化，在分化培养基上轻轻拣出类似鱼雷性状的胚状体，尖朝上底朝下移至生根培养基中，在光照培养环境中诱导其生根，分化培养基为步骤二中得到的WPM，且分化培养基中加入了不同浓度TDZ，生根培养基为步骤二中得到的WPM，在分化培养基中长出鱼雷性质的胚状体后轻轻地用镊子将其夹出置于生根培养基，避免胚状体在愈伤组织上推积出现玻璃化现象，从而达到提高不定芽的成苗率，形成高效的再生体系。

根据上述技术方案，所述步骤二中，WPM粉、肌醇、蔗糖、MES、葡萄糖酸钙、琼脂和水的重量比为2.58∶0.1∶20∶0.5∶0.65∶7.8∶1000。

根据上述技术方案，所述步骤三中，光照培养环境温度为23-25℃，时间为16/8h。