[发明专利]一种帕金森综合征小鼠动物模型的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种帕金森综合征小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，为降低小鼠中m6A修饰水平，获得RNAm6A修饰水平降低的突变体小鼠即为帕金森病小鼠动物模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，通过突变小鼠Mettl14基因从而降低小鼠m6A修饰水平，获得m6A修饰水平降低的突变体小鼠。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，是将小鼠Mettl14基因的第399位的丝氨酸突变为丙氨酸，得到Mettl14^S399A/+点突变杂合小鼠。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，是将小鼠Mettl14基因第11外显子上编码第399位丝氨酸对应的碱基TCA突变为编码丙氨酸的对应碱基GCT，得到Mettl14^S399A/+点突变杂合小鼠。

5.根据权利要求3或4所述的构建方法，其特征在于，为应用CRISPR/Cas9技术构建Mettl14^S399A/+点突变杂合小鼠。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.根据Mettl14第11个外显子上的待敲入位点的位置，sgRNA分别设计在intron10和3'UTR下游的非保守序列中，按照设计的sgRNA序列合成引物，通过退火聚合的方式连入pCS(puro)载体内；

S2.根据小鼠基因组序列设计引物构建打靶载体；

S3.将Cas9/sgRNA及打靶载体显微注射到小鼠受精卵中，最终获得在Mettl14外显子11的DNA序列S399位置突变为A399的Mettl14^S399A/+点突变杂合小鼠(P.Ser399Ala，TCA＞GCT)。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述sgRNA序列为

5’sgRNA7：TACTATGGAACACATTACGG，

3’sgRNA8：ACTGAATTACCATCTTCCAG。

8.权利要求1～7任一所述的方法在构建帕金森综合征小鼠动物模型中的应用。

9.Mettl14基因在构建帕金森病小鼠动物模型中的应用。

10.RNA m6A作为靶点在帕金森综合征中的应用，其特征在于，所述应用选自：用于帕金森综合征诊断、治疗或预防；或用于制备防治帕金森综合征的药物；或用于构建帕金森综合征动物模型。