[发明专利]一种罗丹明B人工抗原和试纸条及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种罗丹明B人工抗原和试纸条及其制备方法与应用，涉及食品安全检测技术领域，本发明提供的罗丹明B半抗原完整的保留了原有结构中的羧基，与待测目标物的电子云密度保持高度一致，有效地提高了小分子半抗原的免疫原性。本发明中的罗丹明B人工抗原及单克隆抗体用于ELISA检测特异性强，IC50值为0.74μg/L。本发明中的罗丹明B人工抗原及单克隆抗体用于时间分辨荧光免疫层析试纸条，灵敏度可达0.5μg/L，并可快速、便捷地实现罗丹明B的定量检测，本发明中的时间分辨荧光免疫层析试纸条灵敏度高，稳定性好。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，更具体地说，它涉及一种罗丹明B人工抗原和试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

罗丹明B是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料，在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。由于其含有三苯甲烷类结构，具有潜在的致癌和致突变性，欧美等国家和地区从1993年起明令禁止其在食品加工中使用，我国卫生部也在2008年将其列入首批食品中可能违法添加的非食用物质名单之中。罗丹明B一般被用作调味品(主要是辣椒粉和辣椒油)染色剂，不科学的使用会造成在食品中残留。

目前，国内外对食品中罗丹明B的常用检测方法有仪器法和免疫层析法。仪器法以高效液相色谱法(HPLC)、高效液相-质谱联用法(HPLC-MS)为主。但由于仪器法的样品前处理复杂繁琐，需要精密昂贵的检测器和质谱等仪器设备，同时还要有专门的技术人员操作仪器，很难达到快速、便捷的现场检测要求，因此限制了其在许多检测机构尤其是基层检测部门的大规模推广使用。而免疫层析类产品多以胶体金、彩色乳胶微球或者荧光素作为标记物。基于胶体金标记技术开发的快速检测产品，存在灵敏度差，批间差异较大等问题；彩色乳胶微球虽然批间差有所改进，但灵敏度依然较低；基于荧光素标记技术的免疫层析灵敏度有了较大提高，也能进行定量检测，但是由于罗丹明B及其抗原本身含有较高的荧光本底信号，且stock位移较小，会对检测产生较大的影响；此外，现有罗丹明B人工抗原的合成均从其本身的羧基端作为活性手臂，偶联载体蛋白，使得制备的人工抗原无法完整的罗丹明B的结构，改变了目标物的电子云密度，降低了免疫原性。

因此，如何研究设计一种能避免颜色干扰、实现定量检测、提高人工抗原的免疫原性的罗丹明B人工抗原和试纸条及其制备方法与应用是我们目前急需解决的问题。

发明内容

为解决现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种罗丹明B人工抗原和试纸条及其制备方法与应用。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

第一方面，提供了一种罗丹明B半抗原，所述半抗原的结构式如下：

第二方面，提供了一种罗丹明B人工抗原，所述人工抗原的结构式如下：

其中，protein为蛋白载体。

优选的，所述蛋白载体为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白中的任意一种。

第三方面，提供了如第二方面所述的一种罗丹明B人工抗原的制备方法，包括以下步骤：

S101：取如权利要求1所述的罗丹明B半抗原，溶解于二甲基甲酰胺DMF中，搅拌充分至完全溶解；

S102：称取蛋白载体后充分溶解在浓度为0.01mol/L的PBS溶液中，形成载体蛋白溶液，在搅拌下将半抗原活化酯逐滴缓慢滴加至载体蛋白溶液中，并在室温下搅拌16～24h；

S103：将步骤S102制得的溶液用0.01mol/L的PBS室温透析3天，每天换3次透析液，以除去未反应的小分子物质；

S104：分装，于4℃保存备用。