[发明专利]一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记、引物组、试剂盒、鉴定方法及其应用有效
申请号: | 202110119774.6 | 申请日: | 2021-01-28 |
公开(公告)号: | CN112725426B | 公开(公告)日: | 2023-05-12 |
发明(设计)人: | 赵琦;谢坤;王宇成;赵锋;詹文瑶 | 申请(专利权)人: | 成都大学 |
主分类号: | C12Q1/6879 | 分类号: | C12Q1/6879;C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
代理公司: | 成都玖和知识产权代理事务所(普通合伙) 51238 | 代理人: | 胡琳梅 |
地址: | 610000*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 波棱瓜 性别 鉴定 特异性 scar 分子 标记 引物 试剂盒 方法 及其 应用 | ||
本发明公开了一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记、引物组、试剂盒、鉴定方法及其应用,属于植物分子遗传学技术领域,波棱瓜是以种子为药用材料的雌雄异株植物,波棱瓜雌株的利用价值更大,在开花前采用形态学和生理学方法很难分辨性别,本发明利用RAPD和SCAR分子标记技术研究与波棱瓜性别研究相关的分子标记;在确立波棱瓜RAPD扩增最佳反应体系的基础上,找到了雌性相关的分子鉴定标记,该SCAR分子标记仅在雌性单株稳定扩增一条大小为423bp的特异条带;本发明获得的1个与雌性性别相关的SCAR分子标记实现了对不同性别波棱瓜的快速、准确的鉴定,将用于鉴定苗期性别未知的植株以及大规模种质材料的检测。
技术领域
本发明属于植物分子遗传学技术领域,具体涉及一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记、引物组、试剂盒、鉴定方法及其应用。
背景技术
波棱瓜(Herpetospermum pedunculosum(Ser.)C.B.Clarke),藏语称色尔格美多,属葫芦科波棱瓜,属一年生攀援草本植物,主产青藏高原东部的四川、云南、西藏等地海拔2300-3500m高海拔地区,其干燥成熟的种子含丰富的脂肪酸、木脂素、多糖、氨基酸和微量元素,具有清热解毒、柔肝的功能,尤其是所含的木脂素类化合物能够明显降低免疫性肝损伤,在现代医学中主要应用于抗乙型肝炎的治疗中。鉴于波棱瓜在肝病治疗中的独特疗效,国内外对其各方面应用的研究日益增多,以往对有关波棱瓜的研究主要集中在组织培养、栽培技术及具体活性成分的提取、分离纯化及药用功能研究等方面。波棱瓜是以种子为药用材料的雌雄异株植物,在生产实践中,为了提高波棱瓜资源利用率,节约人力、物力、土地等资源,保证种子产量,雌株的经济价值要高于雄株,但开花前其性别难以分辨,关于其苗期性别的鉴定体系仍不成熟,因此,开展波棱瓜性别早期鉴定在生产实践中具有重要意义。
针对波棱瓜雌雄价值分化大、营养期间形态极其相似这一现象,为了能尽早给予人工栽培提供实践依据和技术指导,性别鉴定方法的选用显得尤为重要。目前植物性别鉴定的方法大多是以雌雄株外部形态、生理生化差异、染色体组型、同工酶图谱、特异蛋白质含量及核苷酸的差异为依据,而这些方法大多是对已成熟的个体进行性别差异研究,开花前则难以采用形态学或细胞学方法鉴定其性别。随着分子生物学的发展,基于分子标记方法不受外界环境因素影响的优点,越来越多的分子标记(如RAPD、SSR、ISSR、SRAP、AFLP等)被应用于植物的早期性别鉴定研究,尤其是特征序列扩增区域(sequence characterizedamplified regions,SCAR)标记技术,该技术衍生于RAPD分子标记,具有对反应条件不敏感、特异性高、重复性好、鉴定结果稳定可靠等优点。
因此,在人工栽培过程中,若利用与波棱瓜性别决定基因紧密连锁的分子标记(如SCAR标记)进行辅助选择,在苗期就能快速准确地分辨雌雄,这对于生产实践具有十分重要的应用价值。
发明内容
本发明旨在提供一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记、引物组、试剂盒、鉴定方法及其应用,本方案的RAPD-SCAR-PCR扩增体系,最大程度确保了RAPD-SCAR-PCR扩增的稳定性,可以获得更加稳定可靠的鉴定结果,在苗期就能快速准确地分辨雌雄,提高鉴定效率。
为了达到上述的目的,本发明所采用的技术方案是:
一种用于波棱瓜性别鉴定的特异性SCAR分子标记,为核苷酸序列如SEQ.ID.NO1所示的DNA分子。
基于RAPD技术操作简便的优点,该分子标记技术已经成为一种常用的雌雄异株植物分子鉴定技术。但是RAPD对反应条件敏感,重复性和稳定性较差,因此建立稳定、最优的RAPD反应体系是利用RAPD分子标记进行雌雄鉴定研究的基础,本发明就波棱瓜RAPD分析的多个主要影响因素进行了优化,获得了其雌雄鉴定分析较为理想的RAPD扩增体系,最大程度确保了RAPD扩增的稳定性。
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