[发明专利]一种QK纤溶酶基因-水蛭素融合蛋白的制备方法及应用

权利要求书

1.一种QK纤溶酶基因-水蛭素基因融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以QK纤溶酶的基因序列、水蛭素的基因序列为模板，经过扩增拼接取得融合基因序列，构建重组表达质粒，将重组表达质粒转回到感受态细胞中，筛选出高效表达蛋白菌株，扩大培养细胞和诱导表达融合蛋白，得到QK纤溶酶基因-水蛭素融合蛋白；

以QK纤溶酶的基因序列、水蛭素的基因序列为模板，经过扩增拼接取得融合基因序列，包括以下步骤：

将QK纤溶酶的基因序列和水蛭素的基因序列分别进行扩增，得到两个扩增片段，分别进行Kpn I酶切处理，得两个酶切产物，再利用连接酶对两个酶切产物进行融合处理，得到融合基因序列；

将QK纤溶酶的基因序列和水蛭素的基因序列分别进行扩增，包括以下步骤：

QK纤溶酶的基因序列含有调控序列、信号肽序列、前肽序列、成熟肽序列以及终止序列；

扩增QK纤溶酶的基因序列中的调控序列、信号肽序列、前肽序列及成熟肽序列，除去终止序列、在3′端引入kpnI酶切识别位点，5′端引入BanH I酶切位点；

以QK纤溶酶的基因序列、水蛭素的基因序列为模板，经过扩增拼接取得融合基因序列，包括以下步骤：

在 5′端引入Kpn I 酶切位点以及起始密码ATG，3′端为 TAG、TAA 两个终止密码及EcoR I酶切位点；

QK纤溶酶-水蛭素融合基因序列如下：GTGAGAAGCAAAAAATTGTGGATCAGCTTGTTGTTTGCGTTAACGTTAATCTTTACGATGGCGTTCAGCAACATGTCTGCGCAGGCTGCCGGAAAAAGCAGTACAGAAAAGAAATACATTGTTGGATTTAAACAGACAATGAGTGCCATGAGTTCCGCCAAGAAAAAGGATGTTATTTCTGAAAAAGGCGGAAAGGTTCAAAAGCAGTTTAAGTATGTTAACGCAGCCGCAGCAACATTGGATGAAAAAGCTGTAAAAGAATTGAAACAAGATCCGAGCGTTGCATATGTGGAAGAAGATCATATTGCACATGAATATGCGCAATCTGTTCCTTACGGCATTTCTCAAATTAAAGCGCCGGCTCTTCACTCTCAAGCTACACAGGCTCTAACGTAAAAGTAGCTGTTATCGACAGCGGAATTGACTCTTCTCATCCTGACTTAAACGTCAGAGGCGGAGCAAGCTTCGTACCTTCTGAAACAAACCCATACCAGGGACGCAGTTCTCACGGCACACACGTAGCCGGTACGATTTCCGCTTTTAATAACTCAATCGGTGTTCTGGGCGTAGCGCCAAACGCATCGTTATATGCAGTAAAAGTTCTTGACTCAACAGGAAGCGGCCAATACAGCTGGATTATTAACGGCATTGAGTGGGCTATTTCCAACAATATGGATGTTATCAACATGAGCCTTGGCGGACCTTCTGGATCTACAGCTCTGAAAACAGTCGTTGATAAAGCAGTTTCCAGCGGTATCGTCGTTGCTGCCGCTGCCGGAAACGAAGGTTCATCGGGCAGCACAAGCACAGTCGGCTACCCTGCAAAATATCCTTCTACCATTGCGGTAGGTGCGGTAAACAGCAGCACCCAAAGAGCTTCATTCTCAAGCGCAGGTTCTGAGCTTGATGTAATGGCTCCTGGCGTGTCCATCCAAAGCACACTTCCTGGAGGCACTTACGGTGCTTACAACGGAACGTCAATGGCGACTCCTCACGTTGCCGGAGCAGCAGCGCTAATTCTTTCTAAGCATCCGACTTGGACAAACGCGCAAGTCCGTGATCGTTTAGAAAGCACTGCAACATATCTTGGAAACTCTTTCTACTATGGAAAAGGGTTAATCAACGTACAAGCAGCTGCACAATAATTCTCTACCAAGGTCCTTGTTTTTGCTGCCCTGTGCATTTGCTTGACCCATGCAATGACCTATAAGGATTGCACAGCCGATACCACGACTGGATGCTTATGCGGGGGGCATCTCTGCACTGGAGCCTGTGCAAATGACAAGTGCAACAAAAATGATAGGGGAACCTACGTCAAACAGACCGTCGACGACGTCTTTGAAAGTTTTTCATTGGATGGGGAGAATTAA。