[发明专利]一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法

权利要求书

1.一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法，其特征在于，按照以下步骤操作：

S1、建立内标标准曲线：定量称取粉碎后的茶叶样品，然后分别以系列丙烯酰胺标准溶液中的一种浓度为添加样测量各自的丙烯酰胺和[¹³C₃]－丙烯酰胺含量；接着以系列丙烯酰胺标准品溶液和[¹³C₃]－丙烯酰胺同位素标准品溶液浓度比为横坐标，在SIR选定离子扫描模式下分别以质荷比m/z为72和75对应的峰面积比为纵坐标在进行线性回归分析得到标准曲线；

S2、样品前处理：定量称取粉碎后的茶叶样品，然后依次加入同位素标记的丙烯酰胺标准溶液、纯净水、乙腈、无水硫酸镁以及氯化钠，每加入一种试剂涡旋振荡一定时长；然后将混匀的试剂和样品置于水浴环境中进行超声处理，接着进行离心处理，取出适量乙腈，加入PSA充分振荡后再次离心，然后取出上清液并氮吹浓缩至近干燥，再加蒸馏水复溶并过滤，得到前处理样品；

S3、样品检测：将步骤S2制得的前处理样品采用高效液相色谱串联质谱法对待测样品进行检测，通过内标法计算丙烯酰胺的含量。

2.根据权利要求1所述的一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法，其特征在于：所述步骤S1中标准曲线的回归方程为y＝1.0624x－0.0605，R²＝0.9999，其中，x为丙烯酰胺标准品溶液和[¹³C₃]－丙烯酰胺同位素标准品溶液浓度比，y为SIR选定离子扫描模式下分别以质荷比m/z为72和75对应的峰面积比，R²为标准方差。

3.根据权利要求1所述的一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法，其特征在于，所述步骤S1中的系列丙烯酰胺标准溶液按照以下方式配制：

S11、配制丙烯酰胺储备液：准确称取0.1g丙烯酰胺标准品，用蒸馏水定容至100ml，配制成1mg/ml丙烯酰胺储备溶液；

S12、配制丙烯酰胺标准储备液：取1ml 1mg/ml丙烯酰胺储备液，蒸馏水定容至100ml配成0.01mg/ml的丙烯酰胺标准储备溶液；

S13、配制[¹³C₃]－丙烯酰胺同位素内标液：取500μl 1mg/ml[¹³C₃]－丙烯酰胺同位素溶液，用蒸馏水定容至100ml配置成5μg/ml[¹³C₃]－丙烯酰胺同位素储备液；

S14、配制丙烯酰胺标准溶液：分别取10、50、100、500、1000、2000μl丙烯酰胺标准储备溶液，各加入200μl[¹³C₃]－丙烯酰胺同位素内标液，蒸馏水定容至10ml，配制浓度分别为0.01、0.05、0.10、0.50、2.00μg/ml的系列丙烯酰胺标准溶液。

4.根据权利要求1所述的一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法，其特征在于：所述步骤S2中同位素标记的丙烯酰胺标准溶液为[1，2，3，¹³C₃]－丙烯酰胺标准溶液，即丙烯酰胺碳链上1、2、3位的碳原子均被同位素¹³C₃标记。

5.根据权利要求1所述的一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法，其特征在于：所述步骤S2中茶叶样品与同位素标记的丙烯酰胺标准溶液、纯净水、乙腈、无水硫酸镁以及氯化钠的用量比为1g：150～240μl：4～8ml：8～12ml：3～5g：0.5g，所述同位素标记的丙烯酰胺标准溶液的浓度为5μg/ml。

6.根据权利要求1所述的一种茶叶丙烯酰胺含量的快速检测方法，其特征在于：所述步骤S2中涡旋振荡的时长为2～5分钟，混匀的试剂和样品水浴的温度为36～42℃，所述超声处理时间为1～5分钟，第一次离心处理的转速为3500～4200r/min，离心时间6～10分钟；乙腈的取出量为6ml，PSA的添加量为0.2g；第二次离心处理的转速为3600～4500r/min，离心时间为6～12分钟；上清液的取出量为5ml；氮吹时的温度为45～55℃。