[发明专利]表达人源化CD3复合物的非人类动物

权利要求书

1.一种靶向载体，其中包含：

5'小鼠同源臂，

编码包含人CD3ε胞外域的功能性嵌合人/小鼠CD3ε蛋白的CD3ε基因，

编码包含人CD3δ胞外域的功能性嵌合人/小鼠CD3δ蛋白的CD3δ基因，

编码包含人CD3γ胞外域的功能性嵌合人/小鼠CD3γ蛋白的CD3γ基因，和

3'小鼠同源臂，

其中小鼠细胞在与所述靶向载体同源重组后，所述小鼠CD3基因座：

在内源性CD3ε基因座上包含编码所述功能性嵌合人/小鼠CD3ε蛋白的CD3ε基因，

在内源性CD3δ基因座上包含编码所述功能性嵌合人/小鼠CD3δ蛋白的CD3δ基因，和

在内源性CD3γ基因座上包含编码所述功能性嵌合人/小鼠CD3γ蛋白的CD3γ基因。

2.根据权利要求1所述的靶向载体，其中：

所述CD3ε基因包含小鼠CD3ε基因，所述小鼠CD3ε基因包含用人CD3ε编码外显子2至5的部分序列替换小鼠CD3ε编码外显子2至4的部分序列；

所述CD3δ基因包含小鼠CD3δ基因，所述小鼠CD3δ基因包含用人CD3δ编码外显子2至3的部分序列替换小鼠CD3δ编码外显子2至3的部分序列，和

所述CD3γ基因包含小鼠CD3γ基因，所述小鼠CD3γ基因包含用人CD3γ编码外显子2至4的部分序列替换小鼠CD3γ编码外显子2至4的部分序列。

3.根据权利要求2所述的靶向载体，其中还包含选择表达盒。

4.根据权利要求3所述的靶向载体，其中所述选择表达盒：

(i)包含编码对选自下组的药物的抗性的基因：新霉素、潮霉素、嘌呤霉素、氯霉素、壮观霉素，和/或

(ii)侧翼是允许在用重组酶处理时删除该选择表达盒的重组位点。

5.根据权利要求3所述的靶向载体，其中所述选择表达盒位于CD3ε基因的上游。

6.根据权利要求1所述的靶向载体，其中所述功能性嵌合人/小鼠CD3ε蛋白包含SEQ IDNO:33的序列，所述功能性嵌合人/小鼠CD3δ蛋白包含SEQ ID NO:34的序列，所述功能性嵌合人/小鼠CD3γ蛋白包含SEQ ID NO:35的序列。

7.根据权利要求6所述的靶向载体，其中所述功能性嵌合人/小鼠CD3δ蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：24所示，所述功能性嵌合人/小鼠CD3δ蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：25所示，所述功能性嵌合人/小鼠CD3γ蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。

8.根据权利要求1所述的靶向载体，其中在与所述靶向载体同源重组后，所述内源CD3ε、CD3δ和CD3γ基因座分别缺乏编码小鼠内源CD3ε、CD3δ和CD3γ蛋白的功能性胞外域的序列。

9.根据权利要求1-8任一项所述的靶向载体，其中在同源重组后，编码所述功能性嵌合人/小鼠CD3ε蛋白的CD3ε基因取代编码内源性小鼠CD3ε蛋白的基因组核酸序列，编码所述功能性嵌合人/小鼠CD3δ蛋白的CD3δ基因取代编码内源性小鼠CD3δ蛋白的基因组核酸序列，编码所述功能性嵌合人/小鼠CD3γ蛋白的CD3γ基因取代编码内源性小鼠CD3γ蛋白的基因组核酸序列。

10.一种体外修饰分离的小鼠细胞的方法，该方法包括使所述分离的小鼠细胞与权利要求1-8中任一项所述的靶向载体接触。