[发明专利]一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法

权利要求书

1.一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1搭建培养支架；选择支架类型，并制备好以CD-Link为交联剂水凝胶，形成细胞培养基质；

S2制备细胞悬浮液；在搭建好培养支架后制备接种细胞的悬浮液，得细胞悬液，标记细胞；

S3细胞预培养；将细胞悬液滴加到水凝胶表面，放置在34℃～37℃的环境中，让细胞繁殖发展；每天进行数据记录；

S4拉伸环境模拟；对细胞提供拉应力、压应力、切应力刺激加载，模仿细胞在人体内的生理状态，记录细胞发展繁殖数据。

2.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，培养支架所用水凝胶材质包括噬菌体、磁性氧化铁和金纳米颗粒。

3.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，S2制备细胞悬浮液中，使用小分子物质，包括荧光标记phalloidin、核酸染料、活性和毒性检测试剂、增值检测试剂，对细胞悬液内的细胞进行标记，完成标记后再滴加到水凝胶上。

4.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，S3细胞预培养中细胞悬液的滴加速度为20μL/s～60μL/s，细胞悬液静置后再滴加入水凝胶中，其静置时间为5～7min。

5.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，水凝胶制备完成后先放入培养箱内进行环境适应，在水凝胶放入培养箱15min后，向水凝胶内加入细胞悬液。

6.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，在S4拉伸环境模拟的步骤中，选用的施压系统包括flexcell细胞拉伸应力加载培养系统。

7.根据权利要求1所述的一种基于三维细胞培养支架的细胞培养方法，其特征在于，适用的细胞培养领域包括软骨细胞、兔髓核细胞、脂肪组织来源的间充质干细胞、Y7视网膜母细胞瘤细胞、乳腺癌细胞、脂肪来源干细胞、MCF-7癌细胞。