[发明专利]一种吖啶类化合物标记原料工作液及制备方法

说明书

本发明公开了一种吖啶类化合物标记原料工作液及其制备方法，其中，被吖啶类化合物标记的原料为被聚乙二醇活化修饰剂修饰的蛋白质。本发明先将聚乙二醇活化修饰剂与蛋白质溶液混合，聚乙二醇活化修饰剂与蛋白质分子侧链上的活性基团进行修饰反应得到原料，再将吖啶类化合物与该原料进行反应，这样可以提高吖啶标记活性原料得到的复合物的空间位阻，提高稳定性，无需特殊的试剂储存液中即可实现稳定储存。

技术领域

本发明属于化学发光免疫检测技术领域，特别涉及一种吖啶类化合物标记原料工作液及制备方法。

背景技术

化学发光免疫分析法是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。应用于临床检验的化学发光体系有多种，最主要的有鲁米诺及其衍生物、吖啶酯、螺旋金刚烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物和电化学发光体系等。

吖啶类(吖啶酯或吖啶磺酰胺)化学发光体系，因不需要催化剂、只需改变溶液的pH等条件就能直接发光，反应迅速、背景发光低、信噪比高，已经广泛应用于生物及药物分析等领域。但是现有的吖啶类化合物标记原料复合物在试剂储存过程中容易出现不稳定、易水解的现象，研究者们为了提高试剂稳定性，通常选择在试剂储存液中添加较多的保护剂形成特殊的试剂储存液，这一方面对试剂储存液的要求高，另一方面试剂储存液中的保护剂对吖啶类化合物标记原料复合物试剂的检测会造成一定的干扰(特别是一些比较敏感的原料在不同保护剂条件下，反应性能差异较大)，导致检测的灵敏度和准确性下降。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定性好的吖啶类化合物标记原料工作液及制备方法。本研究克服了背景技术的缺陷，通过先对蛋白质进行聚乙二醇修饰得到原料，再进行吖啶标记，可以提高吖啶标记活性原料最终得到的复合物的空间位阻，提高稳定性，无需特殊的试剂储存液中即可实现稳定储存。

为实现本发明的目的，本发明提供了一种吖啶类化合物标记原料工作液，其中，被吖啶类化合物标记的原料为被聚乙二醇活化修饰剂修饰后的蛋白质。

进一步地，所述蛋白质被修饰前具有能够与聚乙二醇活化修饰剂反应的活性基团，所述活性基团为氨基、巯基或羧基，所述聚乙二醇活化修饰剂为mPEG-SCM、mPEG2-NHS、mPEG-SPA、mPEG-SC中的一种或几种。

进一步地，所述聚乙二醇活化修饰剂的分子量为20KD-40KD。

进一步地，所述吖啶类化合物为吖啶磺酰胺或吖啶酯。

本发明还提供了上述吖啶类化合物标记原料工作液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

S1、将聚乙二醇活化修饰剂与蛋白质溶液混合，聚乙二醇活化修饰剂与蛋白质分子侧链上的活性基团进行修饰反应得到原料，所述活性基团包括氨基，巯基，羧基；

S2、将吖啶类化合物与步骤S1得到的原料进行反应。

进一步地，步骤S1中，所述蛋白质溶液的浓度为0.5mg/mL-2mg/mL。

进一步地，步骤S1中，蛋白质与聚乙二醇活化修饰剂的摩尔比为：1:3-1:5。

进一步地，步骤S1中，所述修饰反应的反应温度为2℃-8℃，反应时间为0.5h-2h。

进一步地，步骤S2中，所述吖啶类化合物为吖啶磺酰胺，所述吖啶类化合物与所述原料的摩尔比为15:1。

进一步地，步骤S1中，所述蛋白质为抗体或抗原。

与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括以下：

1、本发明通过先对蛋白质进行聚乙二醇修饰得到原料，再对原料进行吖啶标记，提高了吖啶标记活性原料最终得到的复合物的空间位阻，提高了稳定性，无需特殊的试剂储存液中即可实现稳定储存；