[发明专利]测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒及其在制备糖尿病肾病疾病诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒及其在制备糖尿病肾病疾病诊断试剂盒中的应用，所述外泌体中基因，为hsa‑miR‑296‑5p或mmu‑miR‑296‑5p；本发明试剂盒通过测定hsa‑miR‑296‑5p基因在糖尿病肾病患者血清外泌体中的表达情况，表明hsa‑miR‑296‑5p可以作为人糖尿病肾病诊断的依据，进而表明本发明试剂盒可用于糖尿病肾病的检测。

技术领域

本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒及其在制备糖尿病肾病疾病诊断试剂盒中的应用。

背景技术

糖尿病肾病是由糖尿病引起的肾脏疾病，属于糖尿病最常见的微血管并发症，已成为世界终末期肾脏病的第二位原因。肾间质纤维化是糖尿病肾病(diabetic kidneydisease，DKD)发展至终末期肾病的主要病理过程，而肾小管上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)是肾间质纤维化的关键环节。Snail1是DKD肾小管上皮细胞EMT的关键调节因子。在肾脏上皮细胞正常分化过程中，低表达的Snail1维持肾组织的正常结构及内环境稳态。而病理状态下，升高的Snail1与E-cadherin启动子的E-box特异性结合，通过抑制E-cadherin基因的转录或甲基化，下调E-cadherin，触发上皮细胞EMT的发生。

miRNAs不仅存在于细胞内，而且广泛存在于血液、尿液、脑脊液等细胞外液中。血清及血浆中的miRNAs称为循环miRNAs，循环miRNAs实现生物学功能需要外泌体介导。首先，外泌体是循环miRNAs的主要存在形式，在血循环中，外泌体特殊的脂质双层膜结构将miRNAs与外界核酸酶相隔绝，相比细胞及血浆中游离的miRNAs，外泌体中的miRNAs具有更高的稳定性。其次，外泌体具有靶向功能性，外泌体的膜表面结合蛋白特异性识别靶细胞，通过直接融合胞膜或内陷胞吞作用，水平转移miRNAs进入细胞质，更有效得调控靶细胞基因的表达。

糖尿病肾病(DKD)循环外泌体miRNAs特异性表达谱是在糖尿病背景下，肾脏及肾外组织功能障碍的共同结果。首先，肾脏作为DKD主要病变器官，可释放富集差异表达miRNAs的外泌体，在DKD患者尿液标本中，外泌体miRNAs呈特异性改变。其次，脂肪被认为是循环外泌体miRNAs的主要来源，高糖状态下，包括脂肪在内的所有胰岛素敏感组织均可出现功能障碍，释放差异的外泌体miRNAs。差异表达的循环外泌体miRNAs既是肾脏及肾外组织功能障碍的病理产物，又是加重肾脏损伤的致病因素，是DKD发生和发展的中心环节。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

作为本发明其中一个方面，本发明提供一种测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒，其中：所述外泌体中基因，为hsa-miR-296-5p或mmu-miR-296-5p；所述试剂盒，包括引物，所述引物，其上游引物序列为GAGGGCCCCCCCTCAA，下游引物序列为AGTGCAGGGTCCGAGGTATT，茎环引物序列为GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACAGGA；所述试剂盒能够作为检测糖尿病肾病的分子标志物。

作为本发明所述的测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒的一种优选方案：hsa-miR-296-5p或mmu-miR-296-5p，其成熟体序列为：AGGGCCCCCCCUCAAUCCUGU。

作为本发明所述的测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒的一种优选方案：所述测定血清外泌体中基因表达水平的试剂盒，其检测过程包括，血清外泌体RNA提取、逆转录、qPCR检测所述血清外泌体中基因表达水平。

作为本发明的另一个方面，本发明提供所述的试剂盒在制备糖尿病肾病疾病诊断试剂盒中的应用。