[发明专利]一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法、系统及其应用

权利要求书

1.一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括：

（1）对待鉴定细胞进行有限稀释，按照0.5~1 cell/孔进行铺板，并使用高通量细胞分析系统的明场和/或荧光通道对所述待鉴定细胞进行显微成像，得到培养第0天的显微图像；所述待鉴定细胞包括悬浮细胞和/或贴壁细胞；

（2）培养所述待鉴定细胞，在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像，且所述时间点包含培养第0天；所述至少两个时间点中包含培养第0天，其余时间点包括培养第1天至预期培养结束日期中的任意一个或至少两个；预期培养结束日期为培养第21天；

（3）所述待鉴定细胞生长到预期汇合度75~85%后，追溯所述待鉴定细胞培养第0天的显微图像，确认为单细胞，则所述待鉴定细胞具有单克隆源性，并输出所述待鉴定细胞在相应时间点的显微图像及生长曲线作为单克隆源性的鉴定报告；所述生长曲线以时间点为横坐标，以所述待鉴定细胞的汇合度为纵坐标；

确定待鉴定细胞的单克隆源性的方法包括：

基于汇合度进行鉴定：待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像；若只有一个细胞团，则符合单克隆源性，输出单克隆鉴定报告，报告包括生长曲线和每个时间点的显微图像，否则确定为多细胞；

或，基于第0天图像和预期汇合度共同鉴定：结合二者共同鉴定是否符合单克隆源性；细胞样品孔中可能包含与细胞形态相似的杂质，追溯第0天的图像时，可能会误判为多细胞，此时可以结合汇合度达到预期时拍摄的显微图像，若显示为一个细胞团，则可证明第0天为单细胞，否则，则为多细胞或无细胞样品孔；对所述多细胞样品孔、无细胞样品孔或无繁殖能力的细胞样品孔不再补充培养基和/或不继续拍摄显微图像。

2.一种鉴定细胞单克隆源性的系统，其特征在于，所述系统包括如下模块：

显微成像模块，用于对待鉴定细胞进行显微成像，在明场和/或荧光通道下对孔板上多个样品孔中的所述待鉴定细胞进行显微成像，并获取所述待鉴定细胞的显微图像；

分析处理模块，用于分析所述待鉴定细胞的显微图像，得到所述待鉴定细胞的生长状况，并基于所述待鉴定细胞的生长状况鉴定所述待鉴定细胞的单克隆源性；

所述分析处理模块基于所述显微图像分析所述待鉴定细胞的生长状况，基于所述显微图像确定待鉴定细胞的汇合度，所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时，基于所述待鉴定细胞第0天的显微图像和/或所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像确定细胞是否具备单克隆源性；判断符合单克隆源性的标准为：如果确认第0天是单个细胞，则确定单克隆源性，如果第0天不是单个细胞，则证明该孔中不是单克隆；

所述鉴定方法包括在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像，且所述时间点包含培养第0天；所述至少两个时间点中包含培养第0天，其余时间点包括培养第1天至预期培养结束日期中的任意一个或至少两个；对符合单克隆源性的待鉴定细胞，输出单克隆鉴定报告；所述单克隆鉴定报告包括所述待鉴定细胞的生长曲线和/或相应时间点拍摄的显微图像，所述生长曲线以时间点为横坐标，以所述待鉴定细胞的汇合度为纵坐标；

样品台模块，用于承载所述孔板，所述孔板有多个样品孔，所述显微成像模块对所述孔板上各孔中的待鉴定细胞分别进行拍摄，得到所述待鉴定细胞的显微图像；

样品自动更换模块，用于更新孔板，再由显微成像模块对更新后的孔板上的待鉴定细胞进行拍摄，得到所述更新后的孔板上的待鉴定细胞的显微图像。

3.如权利要求1所述的鉴定方法和/或如权利要求2所述的鉴定细胞单克隆源性的系统在待鉴定细胞的筛选或待鉴定细胞质量控制中的应用。