[发明专利]一种用于检测日本血吸虫的重组抗原、其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于检测日本血吸虫的重组抗原。该重组抗原从N端到C端包含依次连接的日本血吸虫的GST蛋白片段、rSjGCP蛋白片段、Sj23蛋白片段。相比现有的GST抗原，本发明重组抗原最大限度的提高抗原的免疫原性，提高了检测的灵敏度，并且重组抗原的水溶性较高，纯化效率较高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于检测日本血吸虫的重组抗原、其制备方法和应用。

背景技术

日本血吸虫又名裂体吸虫，寄生于人体的血吸虫主要有三种：即流行于非洲北部的埃及血吸虫；流行于拉丁美洲及非洲中部的曼氏血吸虫以及流行于亚洲的日本血吸虫，对宿主产生机械性损伤。

目前，目前用于血吸虫诊断的方法主要有病原学诊断、免疫学诊断和超声诊断等。传统病原学诊断方法是诊断血吸虫病最为可靠、经典，是判断血吸虫病患病与否的金标准，尤其Kato-Katz涂片粪检法以及毛蚴孵育法MHT，但这两种方法均存在费时、费力，且群众依从性差的问题。免疫学诊断因其良好的敏感性、特异性以及实用性等优点，已经成为当前血吸虫病的常用诊断方法，其主要包括：间接血凝试验(IHA)、免疫酶联吸附试验(ELISA)、胶体金标记技术等。然而，现有的间接血凝试验(IHA)(ELISA)依然普遍存在检测时间较长、灵敏度不够的问题，而以免疫酶联吸附试验、免疫胶体金技术为核心的检测方法采用的抗原一般为GST，其免疫原性较差、灵敏度较低。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种用于检测日本血吸虫的重组抗原、其制备方法和应用。该重组抗原融合了GST、rSjGCP、Sj23的部分片段，具有较强的免疫原性，相比现有的抗原对日本血吸虫的检测具有更高的灵敏度。

本发明提供一种用于检测日本血吸虫的重组抗原，从N端到C端包含依次连接的日本血吸虫的GST蛋白片段、rSjGCP蛋白片段、Sj23蛋白片段。

一些实施方案中，所述GST蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述rSjGCP蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述Sj23蛋白片段的氨基酸序列如SEQID NO.3所示。

一些实施方案中，所述GST蛋白片段和rSjGCP蛋白片段通过氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示的连接肽1相连，所述rSjGCP蛋白片段和所述Sj23蛋白片段通过氨基酸序列如SEQID NO.5所示的连接肽2相连。

一些具体实施例中，所述重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，编码该重组抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

一些实施方案中，所述Sj23蛋白片段的C末端还连接有Sj28蛋白片段。一些具体实施例中，所述Sj28蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。所述Sj23蛋白片段和所述Sj28蛋白片段通过氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的连接肽2相连。

一些具体实施中，所述重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码该重组抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

本发明通过NCBI(National Center forBiotechnology Information)美国国立生物技术信息中心数据库查询并下载GST、Sj23、rSjGcp和Sj28蛋白序列。其中，GST蛋白序列号：1Y6E_B，Sj23蛋白序列号：AAA29920，rSjGcp蛋白序列号：AAN39279，Sj28蛋白序列号AAA29892，截取四段蛋白序列中的部分序列(亲水区和免疫原性较高区域)，合成，拼接，获得重组抗原，其氨基酸序列如SEQ IDNO.6、SEQ ID NO.9所示。