[发明专利]一种可以高效清除常温及低温环境中核酸污染的试剂及应用

说明书

本发明公开了一种可以高效清除常温及低温环境中核酸污染的试剂及应用，该试剂由过氧化物、金属盐、稳定剂、酸度调节剂、防冻剂和试剂用水组成，所述过氧化物的浓度为50‑400mM，所述金属盐的浓度为50‑400mM，所述稳定剂的浓度为0.01‑5mM，所述防冻剂的浓度为20wt%‑34wt%，所述试剂的pH值为2‑4。该试剂不仅可以在常温下高效发挥作用，还可以应用在低温环境，能够快速清除被核酸及被病毒衣壳蛋白包裹核酸所污染的环境，而且可以在试剂喷施后，瞬时消解污染，试剂残余物待风干后无毒性，人员无需等待，即刻投入实验；使用安全无毒、不易燃、不易爆，有效避免对操作者的伤害，污染清除率高，应用范围广阔。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体来说，涉及一种可以高效清除常温及低温环境中核酸污染的试剂及应用。

背景技术

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），即PCR反应，是分子生物学中用于放大扩增特定DNA片段的常用技术。该技术在医学、传染性疾病诊断、法医以及生物科学等方面有极其广泛的应用。

通常在临床端有很多治疗的选择以及对于疗效的确定，是基于对病人组织或细胞的DNA和RNA分析。因此只有确保操作环境中没有核酸污染这个前提，才可以保证临床医生得到正确的检测结果。

PCR反应最突出的优点是灵敏度高，最大的特点就是能将原本极微量的DNA，在反应结束后，呈现指数幅度的放大。以小片段的核酸（引物或寡核苷酸）为例，初始仅用几份目标序列，在经过30多个循环的扩增，就可以获得1000多万份的核酸序列。PCR的高灵敏度使操作者能够从微量样本中提取和扩增DNA，从而获得目标DNA的信息。虽然这种水平的灵敏度对实验室有利，但如果不小心被实验室环境中“残余”的其它DNA模板和扩增子（先前扩增获得的PCR产物）所污染，那么这一微量的污染就会在PCR反应中以指数方式放大，从而产生错误或不准确的结果，这些由污染引发的错误很可能导致非目标模板被扩增，即产生假阳性结果，给临床诊断带来干扰。

环境中的核酸污染主要存在于检测场所内表面，仪器、器具、物品的外表面，以及气溶胶和管道内。为了消除实验室里这些“残余”的其它DNA模板和扩增子，很多实验室采用酒精和/或次氯酸钠的擦拭、湿热或干热消杀、紫外线辐照、UDG/UNG酶相结合的方式。

然而这些操作存在有各种缺陷：

70%的酒精和/或2‰的次氯酸钠，对于操作台面、仪器的内外表面的擦拭，主要是进行消毒灭菌，无法有效降解核酸(实施例中有实验数据)，对于DNA模板和扩增子只能起到“稀释”的作用。尤其是在低温环境下，常规消杀剂对于0℃以下环境的效果很差；

湿热或干热消杀，主要是依靠高压蒸汽灭菌手段对离心管、枪头、容器内外表面进行消毒灭菌，不适用于降解核酸；

紫外线辐照，主要是利用波长在200~275nm的短波紫外线对场所长时间进行照射，消杀病菌，对核酸的降解能力集中体现在对大片段的破坏上。而对于核酸片段在500bp以下，尤其对于200bp以下的小片段，紫外线的消杀能力效果很差（马祥，戴镜红，王长年，康桦华.兽医PCR实验室的污染控制策略[J].广东畜牧兽医科技，2020，45(03):20-23）。而200bp以下的小片段，正是临床检测（比如荧光定量）时常用的检测长度。

UDG/UNG酶，是采用在扩增中添加dUTP替代dTTP，利用UDG/UNG酶降解含dUTP核酸片段的方式达到消解核酸的作用。该方法最大的局限性在于只能用于扩增试剂等小量液体反应体系，且仅对富含dUTP的人工扩增产物有效；诸如检测环境中存在的质粒、基因组DNA等模板污染，由于不含dUTP，致使完全无法消除。