[发明专利]一种治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法及应用

权利要求书

1.一种治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取适量治疗颈椎病中药制剂，研磨成细粉，先用纯水超声提取，然后使用甲醇超声提取，合并提取液得到供试品溶液；

（2）混合对照品溶液制备：精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、阿魏酸、延胡索乙素、羌活醇、芍药苷、齐墩果酸、阿魏酸苯乙醇酯、异欧前胡素、镰叶芹二醇11种对照品，加入甲醇水溶液配置成混合对照品溶液；

（3）测定：分别精密量取步骤（1）制备得到的供试品溶液和步骤（2）制备得到的对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，流动相为0.1％磷酸水溶液-乙腈，采用梯度洗脱，记录色谱图；用指纹图谱软件对所得图谱进行处理，即得治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱；

供试品溶液制备的具体步骤为：取治疗颈椎病中药制剂适量，研成细粉，取细粉精密称定，加入纯化水超声提取；提取完成后离心，得上清液1；沉淀物中加入甲醇，继续超声提取，提取完成后离心，得上清液2；将上清液1与上清液2转移至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

步骤（3）中采用的色谱柱为：Waters Symmetry Shield RP18；流动相为A相：0 .1％磷酸水溶液，B相乙腈；

梯度洗脱条件为：0～3 min，95％A→95％A；3～15 min，95％A→85％A；15～20 min，85％A→85％A；20～45 min，85％A→70％A；45～60 min，70％A→ 70％A；60～75 min，70％A→10％A；75～85 min，10％A→10％A；

所述治疗颈椎病中药制剂包括颈痛颗粒、颈痛片和颈痛胶囊。

2.如权利要求1所述的治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法，其特征在于，超声提取的条件为：时间30 min，提取功率300 W，频率40 kHz；

离心条件为：10000转/分，15分钟。

3.如权利要求1所述的治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法，其特征在于，步骤（2）中加入的甲醇水溶液 为50%色谱甲醇。

4.如权利要求1所述的治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法，其特征在于，流动相流速为1 ml/min；柱温为35℃；检测波长为250 nm，进样量20 μl。

5.权利要求1所述的治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法和/或所述构建方法得到的指纹图谱在治疗颈椎病中药制剂质量控制中的应用；

所述治疗颈椎病中药制剂包括颈痛颗粒、颈痛片和颈痛胶囊。

6.一种采用如权利要求1-5任一项所述的指纹图谱对治疗颈椎病中药制剂的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取多个批次的治疗颈椎病中药制剂按权利要求1-5任一项所述的构建方法得到治疗颈椎病中药制剂样品的指纹图谱，将该多个批次治疗颈椎病中药制剂样品指纹图谱按照均值法生成得到对照指纹图谱；

取待测样品制备供试品溶液，按照上述构建方法的步骤进行操作，获得待检测样品指纹图谱；

（2）将待测样品指纹图谱与治疗颈椎病中药制剂对照指纹图谱进行相似性比较，以评价待测治疗颈椎病中药制剂的质量，计算方法为相关系数法。